瘧疾是嚴(yán)重危害人類健康的一種寄生蟲(chóng)病，在廣大的發(fā)展中國(guó)家瘧疾的流行依然是難以遏制。我國(guó)經(jīng)過(guò)多年的防治工作，瘧疾雖已經(jīng)基本得到控制，但海南、云南、廣西等省的部分地區(qū)仍然是瘧疾流行區(qū)。惡性瘧原蟲(chóng)對(duì)傳統(tǒng)的抗瘧藥如氯喹產(chǎn)生抗藥性，是瘧疾難以控制的原因之一。另一方面，瘧疾疫苗和新藥的研制進(jìn)展緩慢，也使瘧疾特別是惡性瘧的控制面臨很大的困難。因此，對(duì)瘧疾疫苗候選抗原以及惡性瘧原蟲(chóng)產(chǎn)生抗藥性的機(jī)制進(jìn)行研究已成為當(dāng)前國(guó)內(nèi)外的研究熱點(diǎn)。 本研究有兩個(gè)主要內(nèi)容：一是惡性瘧原蟲(chóng)海南分離株裂殖子表面蛋白1和2的分型研究。由于不同基因型的惡性瘧原蟲(chóng)蟲(chóng)株其致病性、抗原性及對(duì)藥物的敏感性都有可能不同，因此對(duì)我國(guó)海南省惡性瘧原蟲(chóng)蟲(chóng)株裂殖子表面蛋白1(MSP1)和2(MSP2)進(jìn)行基因分型，了解其分型特點(diǎn)將為瘧疾疫苗的研制和瘧疾分子流行病學(xué)研究提供有價(jià)值的科學(xué)依據(jù)。我們首先從采集到的惡性瘧患者的血樣中提取惡性瘧原蟲(chóng)的基因組DNA，根據(jù)惡性瘧原蟲(chóng)MSP1和MSP2的不同等位基因型序列分別設(shè)計(jì)了4對(duì)和3對(duì)引物，然后通過(guò)套式PCR分別擴(kuò)增出不同等位基因型的MSP1第2、3區(qū)的部分片段和MSP2的第3區(qū)，最后的擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)2％的瓊脂糖凝膠電泳和EB染色后，用紫外分析儀觀察結(jié)果并拍照。結(jié)果55份惡性瘧患者血樣中有52份擴(kuò)增出MSP1基因片段，以MAD20型為主導(dǎo)型(84.6％)，K1型為次要型，未檢出R033型，兩種不同等位基因型混合感染率為15.4％。同時(shí)，55份血樣中有53份惡性瘧患者擴(kuò)增出MSP2基因片段，以3D7型為主導(dǎo)型(83％)， 安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 FC27型為次要型，混合感染率為17%。由此可見(jiàn)，我國(guó)海南省惡性瘧原蟲(chóng)的MSPI 存在MAD20型和Kl型兩種等位基因型，以MAD20型為優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)株;其MSPZ存 在3D7型和FC27型兩種等位基因型，以3D7等位基因家族為主。 二是對(duì)惡性瘧原蟲(chóng)氯哇抗性相關(guān)基因月力”drl和砂rt進(jìn)行多態(tài)性分析。采用套 式PCR擴(kuò)增上述目的基因的相關(guān)片斷，對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行限制性內(nèi)切酶酶切分析， 觀察是否存在突變位點(diǎn)，以確定龍腸，dl.I基因和承rt基因中的關(guān)鍵性點(diǎn)突變是否與 海南株惡性瘧原蟲(chóng)產(chǎn)生氯哇抗性有關(guān)。對(duì)j，fn:dr了基因N86Y點(diǎn)突變，用內(nèi)切酶AP口 I(可酶切野生型基因)和內(nèi)切酶萬(wàn)畢I(可酶切突變型基因)進(jìn)行酶切分析;對(duì) 夕加drl基因的D1246Y突變，用內(nèi)切酶EcoRv(可酶切突變型基因)進(jìn)行酶切分 析:Pfcrt基因中的K76T突變用內(nèi)切酶APol(可切開(kāi)野生型基因)檢測(cè)，A220s 點(diǎn)突變用內(nèi)切酶Bgll檢測(cè)。酶切產(chǎn)物均經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳和EB染色后，紫 外分析儀觀察結(jié)果并拍照。所測(cè)試的45份血樣，經(jīng)體外藥物敏感性測(cè)定，有25 份血樣出現(xiàn)氯喳抗性，20份為氯哇敏感。基因分析結(jié)果表明，45個(gè)樣本中，妒”dl.I 基因第86位氨基酸均未發(fā)生點(diǎn)突變，即86位密碼子是Asn而非突變型的Tyr; 妒”dr了基因發(fā)生D1246Y突變的樣本有3個(gè)，其中1個(gè)是抗性株，2個(gè)為敏感株; Pfcrt基因發(fā)生K76T點(diǎn)突變的樣本有28個(gè)，其中20個(gè)是抗性株，8個(gè)是敏感株; 全部樣本的妙rt基因第220位氨基酸均發(fā)生A22OS點(diǎn)突變。由此可見(jiàn)，我國(guó)海南 株惡性瘧原蟲(chóng)產(chǎn)生氯哇抗性與發(fā)生在幾斥尹t基因中的K76T點(diǎn)突變與有一定的關(guān)聯(lián)， 而與幾腸之dr了基因的多態(tài)性關(guān)系不大。
【學(xué)位單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2003
【中圖分類】：R346
【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
材料和方法
    實(shí)驗(yàn)材料
    實(shí)驗(yàn)方法
結(jié)果
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄一: 致謝
附錄二: 綜述

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 陳林,戴祖瑞,蔡賢錚,脅誠(chéng)治;我國(guó)海南省抗藥性惡性瘧流行情況的變遷[J];廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);1998年01期

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4 諸欣平,周蕾,張新梅,楊靜,楊雅平;云南和海南兩省不同地區(qū)惡性瘧原蟲(chóng)裂殖子表面蛋白2基因型的研究[J];中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志;2001年01期

5 江鋼鋒,洪佳冬,陳沛泉,王善青,蒙鋒;惡性瘧原蟲(chóng)海南分離株裂殖子表面蛋白1基因的分型研究[J];中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志;2001年01期

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本文編號(hào)：2841492