目的探討TGF-β3、透明質(zhì)酸(hyaluronic acid, HA)、甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白(parathyroid hormone-related protein, PTHrP)對人臍帶間充質(zhì)干細胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, HUC-MSCs)成軟骨分化的影響,優(yōu)化培養(yǎng)條件的組合方式。方法體外分離培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細胞,形態(tài)學(xué)觀察,流式檢測表面抗體及成脂、成骨分化鑒定。取P3代細胞,加入不同組合的細胞因子進行成軟骨誘導(dǎo)培養(yǎng),分為1～21 d TGF-β3(G1)、1～28 d TGF-β3(G2)、1～21 d TGF-β3/1～21 d HA(G3)、1～28 d TGF-β3/1～28 d HA(G4)、1～21 d TGF-β3/1～21 d HA、14～21 d PTHrP(G5)、1～28 d TGF-β3、1～28 d HA、14～28 d PTHrP(G6)、1～28 d TGF-β3、1～28 d HA、21～28 d PTHrP(G7)7組。結(jié)果誘導(dǎo)培養(yǎng)28 d和21 d相比較,TGF-β3組和TGFβ3/HA組COL2α1、COL10α1、SOX9、ACAN的表達量上升;TGFβ3/HA/PTHrP組COL2α1、SOX9、ACAN的表達量上升,COL10α1下降。培養(yǎng)相同天數(shù)時,TGFβ3/HA組較TGF-β3組COL2α1、SOX9、ACAN的表達量上升;TGFβ3/HA/PTHrP組同TGF-β3/HA組比較,COL2α1、ACAN、SOX9的表達量增加,COL10α1表達量下降,且PTHrP加入2周較1周效果更明顯。差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。HE和阿利新藍染色結(jié)果與實時熒光定量PCR的結(jié)果一致。結(jié)論 TGF-β3、HA、 PTHrP可以不同程度的促軟骨分化,其中聯(lián)合應(yīng)用TGF-β3,HA 28 d,在第14天時加入PTHrP一起培養(yǎng),這種組合方式促進HUC-MSCs成軟骨分化效果最好,且能抑制細胞肥大。
【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 實驗材料
    1.2 主要試劑與儀器
    1.3 實驗方法
        1.3.1 人臍帶間充質(zhì)干細胞的鑒定
        1.3.2 人臍帶間充質(zhì)干細胞成軟骨誘導(dǎo)分化
        1.3.3 HE染色觀察
        1.3.4 阿利新藍染色觀察
        1.3.5 熒光定量PCR檢測
    1.4 統(tǒng)計學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 人臍帶間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)及鑒定
        2.1.1 人臍帶間充質(zhì)干細胞形態(tài)學(xué)觀察
        2.1.2 流式細胞儀檢測細胞表面抗原
        2.1.3成脂成骨誘導(dǎo)分化能力
    2.2 不同細胞因子組合的人臍帶間充質(zhì)干細胞成軟骨分化的能力
        2.2.1 HE染色
        2.2.2 阿利新藍染色
        2.2.3 熒光定量PCR檢測基因表達量
3 討論

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