癌胚抗原(CEA)是存在于血液中和某些腫瘤細(xì)胞表面的一種高分子量糖蛋白(200KD)。在胎兒和患有CEA分泌性癌癥的患者體內(nèi),CEA的水平明顯高于正常人,因而可作為特異的腫瘤標(biāo)記物,進(jìn)行相關(guān)腫瘤的的診斷和治療。北京生研所研制的C50株CEA單克隆抗體經(jīng)過臨床實驗證明具有親和力高,并具有與人白細(xì)胞、人骨髓無反應(yīng)的特點,在CEA相關(guān)腫瘤的癌灶免疫顯像和治療的領(lǐng)域有廣闊的應(yīng)用前景。本文從抗體生成特性及培養(yǎng)策略的角度對C50株雜交瘤細(xì)胞的體外培養(yǎng)進(jìn)行了初步研究,從而為進(jìn)一步C50細(xì)胞的體外大規(guī)模培養(yǎng)打下了基礎(chǔ)。 本文首先建立了一種特異檢測上清C50抗體濃度的ELISA方法。另外通過蛋白G親和層析,我們將含血清培養(yǎng)基中的牛血清IgG完全去除。當(dāng)這種培養(yǎng)基(-GFCS培養(yǎng)基)被用于C50細(xì)胞體外培養(yǎng)時,僅再需一步蛋白G親合層析即可將C50抗體從培養(yǎng)上清純化出來,最大限度的限制了牛IgG的污染。 通過對C50株雜交瘤細(xì)胞的染色體進(jìn)行計數(shù),我們發(fā)現(xiàn)少數(shù)C50細(xì)胞(16%)的染色體數(shù)目低于80,不在正常范圍(80-112)內(nèi)。另外,有限稀釋法亞克隆C50株雜交瘤細(xì)胞的結(jié)果顯示,C50細(xì)胞的陽性率比較低(84%)。因此,C50細(xì)胞的遺傳不穩(wěn)定性可能從根本上影響了其體外培養(yǎng)時的抗體生成。 通過對體外培養(yǎng)的C50株雜交瘤細(xì)胞的抗體生成動力學(xué)進(jìn)行研究,我們發(fā)現(xiàn)上清C50抗體濃度比較低,不超過20μg/ml,并且不穩(wěn)定。在一個生長周期內(nèi),上清C50抗體濃度與細(xì)胞的活力指數(shù)、活細(xì)胞密度正相關(guān),而細(xì)胞的比生長速率基本保持不變。提高細(xì)胞的接種密度能夠提高最大活細(xì)胞密度和上清C50抗體濃度,使抗體分泌高峰提前。能夠維持C50細(xì)胞正常生長和抗體生成的最低血清濃度為5%。在此基礎(chǔ)上,提高血清濃度能夠使抗體分泌高峰提前。半連續(xù)動態(tài)培養(yǎng)C50細(xì)胞的
【學(xué)位單位】：北京生物制品研究所
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2000
【中圖分類】：R392
【部分圖文】：

細(xì)胞染色體照片

圖9.復(fù)壯前后的C50細(xì)胞的形態(tài)比較(A)未經(jīng)復(fù)壯的C50細(xì)胞;B()取自腸系膜腫瘤組織塊的C50細(xì)胞;(C)取自腹水的C50細(xì)胞圖9.所示:經(jīng)過體內(nèi)復(fù)壯的C50細(xì)胞明顯聚集牛長，這提示C50細(xì)咆可能具群體依賴性，即C50細(xì)胞的生長及抗體分泌依賴于共自身分泌的某些細(xì)胞因子。

Lane4一6:5倍濃縮的20哈GFCSD既E，依次每泳道上樣30林1、20林1、10“l(fā):Lane7:牛I腸:蛋白G親和層析解離峰(圖12)不經(jīng)濃縮，上樣20協(xié)l如圖13.所示:經(jīng)蛋白G親和層析后，一GFCS培養(yǎng)基中的牛血清工幼已被去除。3.用不同血清濃度的培養(yǎng)基培養(yǎng)C50細(xì)胞時，細(xì)胞的生長和抗體分泌為了確定血清對C50細(xì)胞的生長及抗體分泌的影響，本實驗采用漸進(jìn)的方式降低細(xì)胞培養(yǎng)液中的血清濃度，在35一7Oc褚的T一Flask中靜態(tài)培養(yǎng)C50細(xì)胞，比較四個血清濃度梯度的培養(yǎng)液中C50細(xì)胞的生長和抗體分泌。上清中C50抗體的濃度采用CSO一日下SA進(jìn)行檢測。八U︸UCUnUC︸0︵nU甘p口0La六UL乃qd八乙n‘，二1三︵六砌\膠︶知側(cè)韶界鵝入入只只///彭篡么、、一l一一_一一、曰‘---司湯一習(xí)n︸n甘0o0n﹄八甘OLI曰八目尸口﹄U二八口J今曰，︸，，1‘、1八淤眾\卜(︶側(cè)知韶黑122436魂86(
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本文編號：2835131