目的：評價HIV-1特異性CTLs在HIV-1感染中的免疫反應(yīng)，并對HIV-1特異性抗 原表位多肽CTLs進(jìn)行定量和功能方面的研究。方法：應(yīng)用基因克隆、蛋白質(zhì)表達(dá) 和純化等分子生物技術(shù)制備人HLA-A*0201限制的HIV-pol 294-302YI9 (YTAFTIPSI)Tetramer，商品化HIV-gag 77-85 SL9(SLYNTVATL)Tetramer，HIV-pol 476-484 IV9(ILKEPVHGV)Tetramer購自ProImmune，并應(yīng)用三種Tetramer檢測 14例HLA-A*02陽性的HIV-1感染者外周血中的HIV-l表位多肽特異性CTLs的頻 度，同時采用SL9(SLYNTVATL)體外沖擊HIV-1感染者的PBMCs，通過ELISPOT 和ICCS方法檢測產(chǎn)生IFN-γ的病毒特異性CTLs，初步分析特異性CTLs在HIV-1 感染中的作用。結(jié)果：Tetramer SL9、 IV9和YI9檢測出病毒特異性CTLs占CD8+ 的百分比范圍分別為：0． 06％-3． 27％；0． 05％-0． 57％和0． 09％-0． 66％，其檢出陽性 率分別為11／14、 10／14和5／7。ELISPOT和ICCS檢測的產(chǎn)生IFN-γ的細(xì)胞近似， 但遠(yuǎn)低于Tetramer檢測出的病毒特異性CTLs數(shù)量。ELISPOT和Tetramer所檢測 出的HIV-1表位多肽特異性CTLs頻度之間有相關(guān)性(r=0． 8455，P0． 01) 。ICCS 檢測的CD8T細(xì)胞中產(chǎn)生IFN-γ與ELISPOT檢測產(chǎn)生IFN-γ的細(xì)胞結(jié)果一致。結(jié) 論：Tetramer可以方便敏感地檢測出HIV-1表位多肽特異性CThs。ELISPOT和ICCS 是研究CThs功能的重要手段。高頻度的HIV-1表位多肽特異性CD8+T細(xì)胞在感染 者體內(nèi)不同病毒載量水平上以及疾病進(jìn)展的各個時期都有存在，但多于95％的 Tetramer陽性的細(xì)胞是沒有細(xì)胞毒性的。聯(lián)合使用三種方法可以更精確地評價 HIV-1感染者體內(nèi)CTLs的數(shù)量、功能的動態(tài)變化，對于深入了解特異性CTLs在病 毒性感染中的作用，提供了有效的平臺。探索恢復(fù)CTLs功能的機(jī)制，可以為細(xì)胞 免疫治療提供實驗基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2004
【中圖分類】：R392
【部分圖文】：

圖2.HLA重組重鏈和輕鏈分子的表達(dá)和初步純化(12%SDS一以GE鑒定結(jié)果1一2.A*0201菌體裂解物和包含體(33KD);3一4.A*1101菌體裂解物和包含體(33KD);5.睦對照(BL一21);6一7.p一ZM菌體裂解物和包含體(lZKI));M.標(biāo)準(zhǔn)物

圖2.HLA重組重鏈和輕鏈分子的表達(dá)和初步純化(12%SDS一以GE鑒定結(jié)果1一2.A*0201菌體裂解物和包含體(33KD);3一4.A*1101菌體裂解物和包含體(33KD);5.睦對照(BL一21);6一7.p一ZM菌體裂解物和包含體(lZKI));M.標(biāo)準(zhǔn)物

PPLC對復(fù)性后的多膚SIC分子的純化

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 齊義軍;王立東;焦新英;馮笑山;范宗民;高珊珊;何欣;李吉林;常扶保;;河南食管癌高發(fā)區(qū)食管癌及癌旁組織AnnexinⅡ表達(dá)失調(diào)變化[J];癌癥;2007年07期

2 李云峰,方福德;癌蛋白質(zhì)組的研究進(jìn)展[J];癌癥進(jìn)展;2004年01期

3 葛新;苑中甫;;Annexin Ⅱ與惡性腫瘤研究進(jìn)展[J];癌癥進(jìn)展;2009年03期

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5 李長纓,焦淑賢,趙琳,揚(yáng)忠思,劉曉華,胡彬;青島骨髓庫HLA基因多態(tài)性研究[J];中國輸血雜志;2005年04期

6 宋永紅,朱傳福,呂紅娟,戎志全,聶向民,王玫,劉燕;山東骨髓庫漢族人群HLA-A,B,DRB1位點(diǎn)基因頻率調(diào)查[J];中國輸血雜志;2005年04期

7 薛敏,潘芹芹,繆扣榮,周小玉,周小平,趙星,樊u&,梁文飚,費(fèi)小明,汪承亞,Kukuruga D;DNA序列分析鑒定HLA新等位基因B~*0740[J];中國輸血雜志;2005年05期

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10 張伯偉;邢培清;郭如華;別立莉;趙磊;楊瑞云;杜鵑;;河南省造血干細(xì)胞資料庫漢族捐獻(xiàn)者HLA基因多態(tài)性調(diào)查[J];中國輸血雜志;2006年02期

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2 張再興;喉鱗癌相關(guān)蛋白質(zhì)組學(xué)研究及腫瘤標(biāo)志物的鑒定[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

3 張云山;性連鎖遺傳病和HLA基因型的植入前遺傳學(xué)診斷[D];天津醫(yī)科大學(xué);2010年

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5 陳熙;低葉綠素b水稻類囊體膜的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

6 安繼業(yè);河南食管癌高發(fā)區(qū)居民微衛(wèi)星DNA雜合缺失和蛋白質(zhì)組變化研究[D];鄭州大學(xué);2003年

7 賈晉偉;AnnexinⅡ基因在肺癌組織中的表達(dá)分析及其反義表達(dá)載體對肺癌細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2003年

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9 韓世新;遼寧漢族群體HLA-A、B、C和DRB1等位基因分型及與神經(jīng)纖維瘤病Ⅰ型相關(guān)性研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2004年

10 許銘炎;四川彝族、新疆維族HLA-B基因多態(tài)性分析及其應(yīng)用研究[D];汕頭大學(xué);2004年

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1 雷林瑜;AnnexinⅡ、NF-κBp65及VEGF-C在胃癌組織中的表達(dá)及意義[D];鄭州大學(xué);2010年

2 劉智慧;豫籍漢人AIH-Ⅰ型和AIH-Ⅰ型-PBC重疊綜合征在HLA-DRB1和DQA1基因的遺傳易感性[D];鄭州大學(xué);2010年

3 鄧開鳳;利用乙腈與質(zhì)譜技術(shù)篩選鼻咽癌相關(guān)血清標(biāo)志蛋白質(zhì)的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2011年

4 李靜;兒童營養(yǎng)不良血清低分子量蛋白質(zhì)譜圖研究[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2011年

5 王健;HLA-A33分子的體外表達(dá)及鑒定[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

6 高晨;CD44與糖酵解相關(guān)分子在胃癌中的表達(dá)及意義[D];蘭州大學(xué);2011年

7 倪田根;胃癌組織中ENO1、M2-PK的表達(dá)與臨床病理意義[D];蘭州大學(xué);2011年

8 胡維博;小細(xì)胞肺癌血漿差異蛋白的雙向電泳—質(zhì)譜分析[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

9 張印峰;PGD/HLA分型方法MDA-PCR-SBT的建立[D];天津醫(yī)科大學(xué);2011年

10 陳瀟雨;As_2O_3聯(lián)合Annexin Ⅱ反義寡核苷酸抑制膀胱癌BIU-87細(xì)胞侵襲力的研究[D];鄭州大學(xué);2010年

本文編號：2826350