骨形成蛋白—2(Bone Morphogenetic Protein-2，BMP-2)是骨形成蛋白家族成員之一，具有多種生物學(xué)功能，在體內(nèi)不僅可以誘導(dǎo)骨的形成，而且還是胚胎發(fā)育階段必需的細(xì)胞調(diào)節(jié)因子，因此在臨床應(yīng)用具有廣闊的前景。 本實(shí)驗(yàn)采用分子克隆技術(shù)，PCR擴(kuò)增技術(shù)和DNA點(diǎn)突變技術(shù)，將人骨形成蛋白—2基因構(gòu)建到pET35b(+)質(zhì)粒上，轉(zhuǎn)化到BL21(DE3)，構(gòu)建的大腸桿菌菌株JH通過IPTG誘導(dǎo)表達(dá)重組人骨形成蛋白—2。對重組大腸桿菌JH菌株培養(yǎng)特性和表達(dá)研究后，確定了表達(dá)菌株JH最佳表達(dá)人骨形成蛋白—2條件。IPTG誘導(dǎo)表達(dá)重組人骨形成蛋白—2以包涵體的形式存在。本實(shí)驗(yàn)通過DEAE離子交換層析得到高純度的包涵體后，對包涵體變性溶解在氧化—還原(還原型和氧化型谷胱甘肽)復(fù)性系統(tǒng)中，簡單的稀釋方法復(fù)性得到二聚體。最后經(jīng)過肝素親和層析一步純化法，得到高純度的重組人骨形成蛋白—2二聚體和單體。在活性檢測實(shí)驗(yàn)中重組人骨形成蛋白—2二聚體形式明顯地誘導(dǎo)C2C12細(xì)胞產(chǎn)生堿性磷酸酶，表明了重組人骨形成蛋白—2具有很高的活性。由于rhBMP-2屬于TGF-β超家族，在序列上它們有高度同源性，具有高度保守Cys-knot結(jié)構(gòu)，所以rhBMP-2包涵體成功復(fù)性的方法，可能適合于TGF-β超家族的其他成員。同時(shí)，本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的復(fù)性工藝簡單易行，從而得到了大量的有活性的rhBMP-2，因此該工藝也為實(shí)現(xiàn)重組hBMP-2的大規(guī)模生產(chǎn)創(chuàng)造了條件，對hBMP-2生物特性的研究和臨床上的推廣應(yīng)用也具有重要的意義。
【學(xué)位單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2004
【中圖分類】：R346

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)會議論文 前10條

1 劉洋;劉燕;郭榮;;β-環(huán)糊精對蛋白-表面活性劑相互作用的調(diào)控[A];中國化學(xué)會第十一屆膠體與界面化學(xué)會議論文摘要集[C];2007年

2 黃星;馬帥耒;閆明;劉錚;;底物抑制劑輔助胰蛋白酶復(fù)性[A];第一屆全國化學(xué)工程與生物化工年會論文摘要集(下)[C];2004年

3 李偉;李玉林;李一雷;;金屬蛋白酶-26(MMP-26)的表達(dá)和激活及其對α1-抗胰蛋白酶的特異性裂解活性[A];中華醫(yī)學(xué)會病理學(xué)分會2005年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2005年

4 劉軍;高福;;以結(jié)構(gòu)和功能學(xué)的方法篩選并鑒定SARS冠狀病毒特異的細(xì)胞毒性T細(xì)胞表位[A];第六屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會論文集[C];2008年

5 盧滇楠;劉志霞;張敏蓮;劉錚;;新型溫敏型蛋白質(zhì)體外折疊助劑:dextran-grafted-PNIPAAm[A];第一屆全國化學(xué)工程與生物化工年會論文摘要集(下)[C];2004年

6 龔海燕;周金林;周勇志;;鐮形扇頭蜱中新基因RhHp1的分離、克隆與表達(dá)[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第五次代表大會暨第八次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2004年

7 龔海燕;周金林;;鐮形扇頭蜱中新基因RhHp2的分離、克隆與表達(dá)[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第五次代表大會暨第八次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2004年

8 寧鉑濤;湯永民;曹江;沈紅強(qiáng);錢柏芹;張海忠;張怡;郭莉;;抗人CD14新克隆ZCH-7-2F9單鏈抗體原核表達(dá)載體的構(gòu)建表達(dá)及活性鑒定[A];2005年華東六省一市血液病學(xué)學(xué)術(shù)會議暨浙江省血液病學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2005年

9 寧鉑濤;湯永民;曹江;沈紅強(qiáng);錢柏芹;張海忠;張怡;郭莉;;抗人CD14新克隆ZCH-7-2F9單鏈抗體原核表達(dá)載體的構(gòu)建表達(dá)及活性鑒定[A];第10屆全國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會議論文摘要匯編[C];2005年

10 潘傳英;盧柏松;陳宏;Colin E Bishop;;利用HIV-1 TAT融合表達(dá)4個(gè)轉(zhuǎn)錄因子蛋白重編程人的成纖維細(xì)胞[A];中國動物遺傳育種研究進(jìn)展——第十五次全國動物遺傳育種學(xué)術(shù)討論會論文集[C];2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 葛翔;N-異丙基丙烯酰胺類溫敏型聚合物的制備及其協(xié)助蛋白質(zhì)體外復(fù)性研究[D];浙江大學(xué);2009年

2 孔揚(yáng);重組組織型纖溶酶原激活劑變異體（RETEPLASE）工程菌的培養(yǎng)與體外復(fù)性的研究[D];山東大學(xué);2005年

3 馬雪梅;神經(jīng)營養(yǎng)相關(guān)因子基因的克隆、表達(dá)及蛋白的純化研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1997年

4 蒲勤;人骨形成蛋白2成熟肽在大腸桿菌中的表達(dá)、純化及其生物學(xué)活性的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2000年

5 李靜;基因工程方法構(gòu)建高GPx活性的含硒抗氧化酶[D];吉林大學(xué);2008年

6 潘傳英;特定轉(zhuǎn)錄因子在哺乳動物生長發(fā)育和體細(xì)胞重編程過程中的功能研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2010年

7 賈彬;洋蔥伯克霍爾德菌的篩選、鑒定及其脂肪酶基因的高效表達(dá)[D];華中科技大學(xué);2010年

8 崔志芳;溫敏型聚N-異丙基丙烯酰胺凝膠協(xié)助蛋白質(zhì)體外復(fù)性的基礎(chǔ)研究[D];浙江大學(xué);2004年

9 王清明;Apoptin亞細(xì)胞定位機(jī)理研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2004年

10 高永貴;溶菌酶和重組人干擾素-γ包涵體體外折疊復(fù)性的研究[D];浙江大學(xué);2002年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 孫晉華;重組人骨形成蛋白-2在大腸桿菌中的高效表達(dá)及體外復(fù)性[D];暨南大學(xué);2004年

2 金佳鈺;改性聚N-異丙基丙烯酰胺協(xié)助蛋白質(zhì)體外復(fù)性研究[D];浙江大學(xué);2011年

3 葉才偉;洋蔥伯克霍爾德菌脂肪酶的高效表達(dá)、純化及其體外復(fù)性的研究[D];華中科技大學(xué);2011年

4 華松;山羊骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外分離與培養(yǎng)[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2004年

5 黃旋平;hBMP-2真核表達(dá)載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2007年

6 譚圓;人類胸腺核苷酸合成酶結(jié)構(gòu)及其與抑制劑相互作用關(guān)系[D];青島科技大學(xué);2011年

7 張志成;突變型βFGFR2IIIc胞外段的原核表達(dá)，體外復(fù)性及活性研究[D];暨南大學(xué);2006年

8 陳麗君;金屬螯合色譜耦合人工伴侶輔助EGFP包含體蛋白質(zhì)復(fù)性[D];天津大學(xué);2008年

9 張拓宇;滲透劑與人工伴侶耦合作用輔助蘋果酸脫氫酶復(fù)性研究[D];天津大學(xué);2007年

10 陳望化;重組組織型纖溶酶原激活劑變異體（RETEPLASE）復(fù)性研究[D];山東大學(xué);2006年

本文編號：2826233