目的： 驗(yàn)證已知的白念珠菌菌絲相細(xì)胞的理想培養(yǎng)條件；通過對氟康唑敏感程度不同的白念珠菌酵母相和菌絲相細(xì)胞氟康唑作用靶酶基因ERG11序列的比較研究，以探討兩種細(xì)胞形態(tài)在基因序列上的差異性，從而為白念珠菌的病原真菌學(xué)研究其實(shí)驗(yàn)對象的選擇(菌絲相或酵母相細(xì)胞)提供理論依據(jù)。 方法： 以同一母體來源的16株對氟康唑敏感程度不同的白念珠菌作為研究對象(分別為CA-1，CA-2，…，CA-17，無CA-10)，采用RPMI1640培養(yǎng)基(含10％的小牛血清)，37℃，連續(xù)傳代培養(yǎng)7天，共轉(zhuǎn)種12次，記錄不同觀察時間菌絲相和酵母相細(xì)胞數(shù)，計算菌絲相細(xì)胞形成率。分別提取酵母相和菌絲相細(xì)胞的基因組DNA。設(shè)計7對引物，分段擴(kuò)增白念珠菌酵母相和菌絲相細(xì)胞的ERG11基因。擴(kuò)增產(chǎn)物單鏈變性后，進(jìn)行非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(PCR-SSCP)，觀察結(jié)果并選擇兩種細(xì)胞形態(tài)間具有差異的片段行DNA序列測定。 結(jié)果： 1．以RPMI1640(pH=7.5，含10％小牛血清)為培養(yǎng)基，37℃?zhèn)鞔囵B(yǎng)7天(轉(zhuǎn)種12次)后，每株白念珠菌的菌絲相細(xì)胞形成率均達(dá)99％以上； 2．ERG11的分段擴(kuò)增結(jié)果顯示每株白念珠菌均能擴(kuò)增出目的片段，不存在敏感菌株和耐藥菌株的差異； 3．SSCP分析及DNA序列測定結(jié)果顯示白念珠菌的酵母相和菌絲相細(xì)胞ERG11基因序列存在多位點(diǎn)的差異。 結(jié)論： 1．RPMI1640(pH=7.5，含10％小牛血清)，37℃?zhèn)鞔囵B(yǎng)7天(轉(zhuǎn)種12次)是獲得白念珠菌菌絲相細(xì)胞的理想條件； 2．白念珠菌的酵母相和菌絲相細(xì)胞間部分基因序列存在差異； 3．白念珠菌的菌絲相細(xì)胞是進(jìn)行其病原真菌學(xué)研究的適宜研究對象。
【學(xué)位單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2003
【中圖分類】：R379
【部分圖文】：

第133一423bp，第403一7olbp，第678一975bp，第948一1254bp，第1229一1525bp和第1495一lso4bp，一長度分別為23lbp、29lbp、299bp、298bp、307bp、297bp和310bp)的結(jié)果顯示所有菌株其ER‘jj基因的分段擴(kuò)增結(jié)果均為陽性。圖5、

人學(xué)2000級傾卜論文自念珠菌酵母相和菌絲相ERGll纂活.的比較研火圖6分別為引物對Bl一BZ對白念珠菌CA一l，CA一2，…，CA一8和白念珠菌CA一9，CA一11，…，CA一17ERGjj的擴(kuò)增結(jié)果;圖7、(圖8貝l]分別為引物對Gl一GZ對自念珠菌CA一l，CA一2，…，CA一8和白念珠菌CA一9，CA一11

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本文編號：2825966