【摘要】： 目的 建立紫外輻射損傷人角質細胞(HaCaT細胞株)的模型。研究UVB對細胞周期的進程和細胞凋亡情況，并研究了維生素E(VE)對紫外照射的保護作用以及相關基因p53和bc1-2在這些作用下的表達。方法采用細胞培養(yǎng)、MTT染色法、流式細胞技術、western蛋白免疫印跡法等技術觀察不同劑量UVB照射下培養(yǎng)不同時間后的HaCaT細胞存活率、細胞周期分布及凋亡的發(fā)生以及加入抗氧化劑后的情況，以及上述情況下p53、bc1-2表達的變化。結果 1．UVB劑量不同，培養(yǎng)時間相同時，隨劑量增加，存活率逐漸減少；照射劑量相同，培養(yǎng)時間不同時，隨時間延長，細胞存活率下降到最低值后有恢復(照射15min除外)。2．細胞周期結果分析表明：小于5min的UVB照射劑量，隨著細胞培養(yǎng)時間的延長，細胞增殖指數(shù)：{(S+G2)／(G1+S+G2)}不斷提高；大于或等于5min的照射劑量，隨培養(yǎng)時間延長細胞增殖指數(shù)逐漸減少。UVB以時間劑量依賴方式抑制HaCaT細胞增殖能力。3．無論是從形態(tài)學還是流式細胞圖我們發(fā)現(xiàn)HaCaT細胞在正常情況下也存在細胞凋亡。4．隨UVB劑量增加，培養(yǎng)時間相同時，凋亡率逐漸增加；照射劑量相同，隨培養(yǎng)時間延長，凋亡率也逐漸增加。5．VE對UVB照射所致的HaCaT細胞生長抑制有保護作用，40μg／ml為VE最佳劑量并且予照射前和照射前后加入保護作用更佳。6．加入VE后對UVB照射后的PI值明顯升高，細胞凋亡率降低了約50％。7．UVB誘導HaCaT細胞中p53和p-p53(Ser15)的表達增強，p53在照射后12h達峰值；p-p53的表達維持12h。bc1-2表達顯著降低，照射后24h內都維持較低水平。8．VE的加入使UVB誘導HaCaT細胞中p53基因表達下降，檢測不到p-p53(Ser15)的表達。而bc1-2表達量增加，隨培養(yǎng)時間延長bc1-2逐漸下降。結論UVB在一定的照射劑量和培養(yǎng)時間內抑制人角質細胞的生長。UVB誘導HaCaT細胞發(fā)生G1期為主的細胞周期阻滯以及細胞凋亡。VE對此有拮抗作用。p53、p-p53(Ser15)和bc1-2的基因表達在UVB誘導的損傷反應中起一定作用。bc1-2參與了VE對UVB的損傷保護作用。
【學位授予單位】：中國人民解放軍第一軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2003
【分類號】：R363

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本文編號：2823577