幽門(mén)螺桿菌是重要的致病菌，感染約一半的人類(lèi)人口。幽門(mén)螺桿菌最為重要的特征是含有極為豐富的尿素酶，此酶可將尿素迅速分解為氨和二氧化碳。尿素酶有很強(qiáng)的抗原性。據(jù)此特點(diǎn)，人們發(fā)展了依賴(lài)尿素酶的診斷方法，如快速尿素酶試驗(yàn)、呼氣實(shí)驗(yàn)、血清學(xué)方法等。 幽門(mén)螺桿菌不易培養(yǎng)，要獲得大量的Hp蛋白，需要進(jìn)行重組表達(dá)。我們選擇了尿素酶B亞基進(jìn)行重組表達(dá)。 我們根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道設(shè)計(jì)引物，應(yīng)用PCR技術(shù)從臨床分離株中擴(kuò)增出ureB基因，克隆入大腸桿菌克隆載體pGEM-7zf(+)，測(cè)序后經(jīng)同源性比較，證實(shí)為ureB基因。進(jìn)一步亞克隆到大腸桿菌表達(dá)載體pBV220進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，蛋白電泳可見(jiàn)重組蛋白表達(dá)，分子量大小與預(yù)期一致，表達(dá)形式主要為包涵體。Western Blot實(shí)驗(yàn)表明重組蛋白有反應(yīng)原性，離子交換色譜純化后作為DIFGA的抗原檢測(cè)從血站收集的血清，所得數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道近似，重復(fù)性良好。 第 四 軍 醫(yī) 大 學(xué) 碩士 學(xué) 位 論 文 因非融合表達(dá)的產(chǎn)物不易純化，我們又將ureB基因亞克隆到大腸桿菌表達(dá) 載體pRSET什進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。蛋白電泳可見(jiàn)重組蛋白表達(dá)，分子量大小與預(yù)期 一致，表達(dá)形式主要為包涵體。親和色譜純化后包被硝酸纖維素膜，用DIFGA 檢測(cè)從血站收集的血清，所得數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道近似，重復(fù)性良好。 以上結(jié)果表明，重組克隆后表達(dá)幽門(mén)螺桿菌尿素酶B亞基可以與Hp感染者 血清中的抗UreB抗體反應(yīng)（不受Hp異質(zhì)性影響X 重組蛋白用作抗原以DIFGA方 法檢測(cè)Hp感染是可行的。
【學(xué)位單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2002
【中圖分類(lèi)】：R346

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

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2 閻小君,蘇成芝;生物芯片技術(shù)在Hp診斷和研究中的應(yīng)用[J];世界華人消化雜志;1999年09期

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本文編號(hào)：2820820