目的：探討從新生大鼠周?chē)窠?jīng)分離、培養(yǎng)、純化獲得大量雪旺細(xì)胞的有效手段，觀察體外培養(yǎng)雪旺細(xì)胞的增殖特征及其對(duì)堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic Fibroblast Growth Factor ,bFGF)刺激的反應(yīng)。 方法：取新生（出生2～5天）SD大鼠的雙側(cè)坐骨神經(jīng)，仔細(xì)去除神經(jīng)外膜后，雙酶法短時(shí)間消化，運(yùn)用反復(fù)植塊法，同時(shí)加用抗有絲分裂藥物Geneticin抑制成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)，獲得純化的雪旺細(xì)胞，S-100蛋白免疫組化法鑒定，觀察其生長(zhǎng)并繪制生長(zhǎng)曲線，按照細(xì)胞倍增時(shí)間公式計(jì)算其倍增時(shí)間，運(yùn)用MTT法和流式細(xì)胞儀測(cè)定雪旺細(xì)胞對(duì)不同濃度的bFGF的反應(yīng)。 結(jié)果：運(yùn)用上述培養(yǎng)方法能夠明顯抑制成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)，獲得大量雪旺細(xì)胞，經(jīng)S-100蛋白免疫組化鑒定，雪旺細(xì)胞純度達(dá)95％以上，消化傳代后，雪旺細(xì)胞純度達(dá)98％以上，細(xì)胞數(shù)量達(dá)1×106/ml以上；繪制其生長(zhǎng)曲線，并計(jì)算得出體外培養(yǎng)的第二代雪旺細(xì)胞體外倍增時(shí)間為8天；以不含bFGF組為對(duì)照組，bFGF濃度分別為1ng/ml和10ng/ml的兩組可明顯增加雪旺細(xì)胞密度，與對(duì)照組之間差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.001），流式細(xì)胞儀檢測(cè)：經(jīng)濃度為10ng/ml的bFGF處理后，處于S期(Synthesis phase)和G2M期(Gap2 phase and Mitosis phase)的雪旺細(xì)胞明顯多于不含bFGF的對(duì)照組，兩者之間差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01）。 結(jié)論：本培養(yǎng)方法能夠獲得大量高純度的雪旺細(xì)胞，適宜濃度的bFGF對(duì)雪旺細(xì)胞有較強(qiáng)的促增殖作用，為組織工程修復(fù)神經(jīng)缺損的實(shí)驗(yàn)研究提供了可靠的細(xì)胞來(lái)源。
【學(xué)位單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2004
【中圖分類(lèi)】：R329.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2820736