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雪旺細(xì)胞體外培養(yǎng)及相關(guān)性狀的實(shí)驗(yàn)研究

發(fā)布時(shí)間:2020-09-17 12:51
   目的:探討從新生大鼠周?chē)窠?jīng)分離、培養(yǎng)、純化獲得大量雪旺細(xì)胞的有效手段,觀察體外培養(yǎng)雪旺細(xì)胞的增殖特征及其對(duì)堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic Fibroblast Growth Factor ,bFGF)刺激的反應(yīng)。 方法:取新生(出生2~5天)SD大鼠的雙側(cè)坐骨神經(jīng),仔細(xì)去除神經(jīng)外膜后,雙酶法短時(shí)間消化,運(yùn)用反復(fù)植塊法,同時(shí)加用抗有絲分裂藥物Geneticin抑制成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng),獲得純化的雪旺細(xì)胞,S-100蛋白免疫組化法鑒定,觀察其生長(zhǎng)并繪制生長(zhǎng)曲線,按照細(xì)胞倍增時(shí)間公式計(jì)算其倍增時(shí)間,運(yùn)用MTT法和流式細(xì)胞儀測(cè)定雪旺細(xì)胞對(duì)不同濃度的bFGF的反應(yīng)。 結(jié)果:運(yùn)用上述培養(yǎng)方法能夠明顯抑制成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng),獲得大量雪旺細(xì)胞,經(jīng)S-100蛋白免疫組化鑒定,雪旺細(xì)胞純度達(dá)95%以上,消化傳代后,雪旺細(xì)胞純度達(dá)98%以上,細(xì)胞數(shù)量達(dá)1×106/ml以上;繪制其生長(zhǎng)曲線,并計(jì)算得出體外培養(yǎng)的第二代雪旺細(xì)胞體外倍增時(shí)間為8天;以不含bFGF組為對(duì)照組,bFGF濃度分別為1ng/ml和10ng/ml的兩組可明顯增加雪旺細(xì)胞密度,與對(duì)照組之間差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001),流式細(xì)胞儀檢測(cè):經(jīng)濃度為10ng/ml的bFGF處理后,處于S期(Synthesis phase)和G2M期(Gap2 phase and Mitosis phase)的雪旺細(xì)胞明顯多于不含bFGF的對(duì)照組,兩者之間差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 結(jié)論:本培養(yǎng)方法能夠獲得大量高純度的雪旺細(xì)胞,適宜濃度的bFGF對(duì)雪旺細(xì)胞有較強(qiáng)的促增殖作用,為組織工程修復(fù)神經(jīng)缺損的實(shí)驗(yàn)研究提供了可靠的細(xì)胞來(lái)源。
【學(xué)位單位】:山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位年份】:2004
【中圖分類(lèi)】:R329.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào):2820736

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