背景：干細胞移植在心臟疾病治療中的應用日漸顯示出巨大的前景，骨髓間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells，MSCs)由于具有易獲、易擴增的優(yōu)越性，成為當今研究的熱點。對MSCs的了解仍存在較多不可知之處，但由于動物實驗中取得的令人鼓舞的成果，目前已進入臨床試驗，這就更需要基礎研究的支持，從而使運用更安全、更有效和可控。在對MSCs移植能改善心功能的機理研究中，對MSCs是否能在宿主心肌內(nèi)分化成具有主動收縮功能的細胞則存在較大爭議，因為無法直接在宿主心肌內(nèi)觀察移植細胞的收縮。而就現(xiàn)階段的技術水平而言，只有從側(cè)面來間接說明這一點，即觀察移植入心肌環(huán)境中的MSCs分化成的細胞是否具有收縮功能的結(jié)構(gòu)基礎，以及宿主心肌環(huán)境中是否存在能促進這種分化的必要條件。 目的：在建立正常心肌細胞及心肌組織的肌小節(jié)表達模型基礎上，將MSCs移植入正常心肌組織中，觀察MSCs在宿主心肌內(nèi)結(jié)構(gòu)的動態(tài)變化；并在體外模擬此過程，觀測心肌微環(huán)境的促分化作用，探討宿主心肌誘導MSCs定向分化的條件及初步機制。 重慶醫(yī)科大學碩士學位論文 材料和方法: 1.選用健康成年Wistar大鼠心肌組織冰凍切片及新生鼠心肌細 胞，熒光免疫檢測thin、MHC、Cx43的表達情況，以titin的兩個抗原 部位為橋梁來觀測肌小節(jié)的形態(tài)。 2.采用BrdU及DAPI雙標記MSCs后植入正常Wistar大鼠左室 下壁心肌內(nèi)，術后存活的動物按時間段隨機分為:即刻組、1周、2周、 4周、6周、8周、10周、12周組(n=3一4)，按各組所示時間段取出心 臟，冰凍切片，l正染色及免疫熒光結(jié)合激光共聚焦顯微鏡檢測titinZ 帶部分、A帶(M線)部分、MHC及Cx43的表達，同時觀察注射后 宿主心肌的變化情況。 3.將新生鼠心肌細胞培養(yǎng)上清液制成條件培養(yǎng)基，作用于MSCs; 或?qū)⑿律笮募〖毎c標記MSCs共同培養(yǎng)1周，免疫熒光檢測上述 蛋白質(zhì)的表達情況，觀察不同的環(huán)境因素對MSCs分化的影響。 結(jié)果: 1.使用titin作為檢測標志顯示正常心肌組織及新生鼠心肌細胞， 可以觀測到規(guī)則組裝的肌小節(jié)的Z帶和M線部分。心肌細胞之間形成 Cx43表達的帶狀結(jié)構(gòu)。 2.MSCs植入正常心肌組織后能存活至12周，部分移植細胞表達 titin，且與宿主心肌細胞相鄰的細胞表達titin組裝程度更高，隨時間延 長表達逐漸明顯，其后進入平臺期，但細胞體積及胞漿發(fā)育均不及正 常心肌細胞;在移植細胞與宿主細胞之間可檢測到Cx43的表達。 重慶醫(yī)科大學碩士學位論文 3.移植細胞被纖維組織包裹，部分植入細胞分化為纖維樣細胞; 可見移植區(qū)域血管的形成;宿主心肌細胞局部結(jié)構(gòu)稍紊亂，未發(fā)現(xiàn)排 斥反應的證據(jù)。 4.正常MSCs中部分細胞可表達少量Cx43以及titin;條件培養(yǎng)基 和混合培養(yǎng)均可促進MSCs的心肌樣分化，但后者使分化程度更高; 混合培養(yǎng)條件下，MSCs可和心肌細胞之間形成縫隙連接。 結(jié)論: 1.MSCs可以在正常心肌組織內(nèi)存活并定向分化，但分化程度不 高，尚未具備收縮的完整結(jié)構(gòu)基礎; 2.與心肌細胞形成縫隙連接是實現(xiàn)MSCs高分化的重要條件。
【學位單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2004
【中圖分類】：R329

【共引文獻】

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本文編號：2811696