目的：從已建株的抗堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)單克隆抗體雜交瘤細胞再克隆化，篩選出親和力高、特異性強的克隆細胞，生產(chǎn)腹水型單抗，經(jīng)純化應(yīng)用于高靈敏度的bFGF酶聯(lián)免疫吸附檢測(ELISA)方法的建立，為探討bFGF單抗生產(chǎn)、純化以及研究生物學(xué)作用提供高靈敏度的ELISA檢測方法。 方法：本實驗將已建株的2H2和2B5注入Balb/c小鼠制備腹水型單抗，用Protein-A親和層析方法純化，再經(jīng)SDS-PAGE電泳和Western-blot分析純化結(jié)果。以Sephadex G-200和DEAE-Sephorose Fast Flow純化自制鼠抗bFGF血清。以碘化鈉法對多抗進行辣根過氧化物酶(HRP)標記。2B5單抗作為包被抗體，酶標多抗作為檢測抗體建立bFGF夾心酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)檢測方法，對2組各十個樣品進行檢測并通過統(tǒng)計學(xué)分析確定方法的適合性和精密度，以2H2單抗建立bFGF的間接ELISA和競爭ELISA檢測方法。 結(jié)果：方陣滴定滴定法確定夾心ELISA檢測方法中2B5單抗最佳包被濃度為1：80，酶標多抗最佳工作濃度為1：50，靈敏度可以達到1ng／孔，對100ng／孔級的bFGF樣品的檢測，適合性X_2值=32.84，檢測精密度為82％；對10ng／孔級bFGF樣品的檢測，適合性X_2=3.10，精密度為82.9％。2H2單抗建立bFGF的間接ELISA和競爭ELISA檢測方法，靈敏度可以達到1pg／孔。
【學(xué)位單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2002
【中圖分類】：R392.11
【部分圖文】：

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本文編號：2811739