目的：構(gòu)建模擬小鼠IL-18天然生成的真核表達(dá)載體體系。 方法：用RT-PCR方法從小鼠脾細(xì)胞的總RNA中擴(kuò)增出編碼小鼠IL-18前體(mpro-IL-18)的基因，克隆至T載體pCR4-TOPO后，再定向克隆至真核表達(dá)載體pVR1012，構(gòu)建成小鼠IL-18前體真核表達(dá)載體質(zhì)粒pVR1012-mpro-IL-18；將小鼠IL-1β轉(zhuǎn)換酶mICE的基因從克隆載體亞克隆至真核表達(dá)載體pEGFP-N1，構(gòu)建成小鼠IL-1β轉(zhuǎn)換酶真核表達(dá)載體質(zhì)粒pEGFP-N1-mICE。將pVR1012-mpro-IL-18和pEGFP-N1-mICE單獨(dú)或共同轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞，用RT-PCR法檢測兩載體的mRNA表達(dá)；用免疫印跡法檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞中IL-18蛋白的表達(dá)；用ELISA法檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-18的分泌；用~3H-TdR摻入法檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-18與IL-2共同作用的小鼠脾細(xì)胞增殖。將pVR1012-mpro-IL-18、pEGFP-N1-mICE和pVR1012-hIL-2三種真核表達(dá)載體質(zhì)粒聯(lián)合肌肉注射健康小鼠，用JAM-TAST法檢測該小鼠脾細(xì)胞CTL殺傷同基因型腫瘤細(xì)胞的能力。 結(jié)果：正確構(gòu)建了小鼠IL-18前體及小鼠IL-1β轉(zhuǎn)換酶兩種真核表達(dá)載體質(zhì)粒，分別轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞后能檢測到相應(yīng)mRNA的表達(dá)。在pVR1012-mpro-IL-18單 中文摘要 獨(dú)gb pVR1012－mpro－IL刁 和 pEGFP－NlmlCE共轉(zhuǎn)染的 COSj細(xì)胞中能檢測到前體和成熟兩種不同形式的 ILIS 蛋白表達(dá)，并且 IL刁 8能分泌到上清中；所分泌的 IL刁 與IL上聯(lián)合作用可增強(qiáng)小鼠脾細(xì)胞增殖能力。pVR1012－ mpro－IL－18、pEGFP－NlmICE禾 pVR1012－h(huán)IL－2三種真 核表達(dá)載體質(zhì)粒聯(lián)合肌肉注射健康小鼠，顯著提高了其 脾細(xì)胞 C TL殺傷同基因型腫 瘤細(xì)胞 白 自力。 結(jié)論：構(gòu)建了模擬小鼠 IL刁 8天然主成的真核表達(dá) 載體體系，該體系與 幾二真核表達(dá)載體質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染有可 能用于腫瘤的基囚治療。
【學(xué)位單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2002
【中圖分類】：R392

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本文編號：2811686