睪丸是產(chǎn)生精子、維持性征的重要器官，出生后睪丸的發(fā)育成 熟、各種細(xì)胞的功能分化以及精子發(fā)生都受到諸如促性腺激素釋 放激素（GnRH）、促甲狀腺激素釋放激素（TRH）、胰島素樣生長 因子（IGFs）、內(nèi)皮素（ET）、血管緊張素-Ⅱ（AT-Ⅱ）等多種肽 類因子的調(diào)控，其中轉(zhuǎn)化生長因子-β（Transforming growth factor β，TGF-β）超家族即是其中一類重要的睪丸功能局部調(diào)節(jié)因子。 TGF-β超家族是一個(gè)由分泌型的多肽分子，包括TGF-βs、活 化素（Activins）、抑制素（Inhibins）、骨形態(tài)形成蛋白（Bone morphogenetic proteins, BMPs）等構(gòu)成的細(xì)胞因子超家族，在生物 機(jī)體及各個(gè)器官的發(fā)育過程中起重要的作用。TGF-β通過跨膜的 一 1型和＊型絲氨酸／蘇氨酸激酶受體形成異源受體復(fù)合物，并使I 型受體活化，通過Smads通路傳遞信號(hào)。Smads蛋白是近年發(fā)現(xiàn) 的TGFo超家族下游一類細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，可將信號(hào)直接從 細(xì)胞膜轉(zhuǎn)導(dǎo)入細(xì)胞核內(nèi)，具有轉(zhuǎn)錄活化的作用。Smads編碼42—60 kD的蛋白質(zhì)，由兩段高度保守的氫基端和叛基端結(jié)構(gòu)域（MH 和MHZ）和中間富含脯氨酸的高變連接區(qū)組成。根據(jù)其結(jié)構(gòu)和功 能特性分為三類：第一類受體激活的Smads或通路限制性Smads （Receptor－regulated Smads，R－Smads／Pathway－restricted Smads）， 它們的 C端結(jié)構(gòu)域末端含有一個(gè)保守的磷酸化位點(diǎn) SS（V／M）S， 可與1型受體直接作用并被磷酸化。這一類Smads在特定的 TGFB超家族成員介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中發(fā)揮作用，如：BMPs 通過Smadl、Smads和Smads，TGFB和活化素通過SmadZ和 Smad3。第二類為通用的 Smads（Common－mediator Smads， Co．Smads），目前在脊椎動(dòng)物發(fā)現(xiàn)的此類 Smad只有 Smad4。在它 的C端結(jié)構(gòu)域沒有磷酸化位點(diǎn)，但它可與其它R－Smads相互作用 并形成穩(wěn)定的異源三聚體。這種異源三聚體的形成是信號(hào)得以轉(zhuǎn) 導(dǎo)所必需的。第三類為抑朱性 Smads（Inhibitory Smads，I－Smads）， 包括Smad6和Smad7，它們能夠通過阻斷R刁mads與受體或 Co．Smads的結(jié)合，對Smads的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路發(fā)揮負(fù)調(diào)控作用。 目前已證實(shí)TGF p超家族成員及其受體在辜丸中均有表達(dá)， 無論是在分裂期生精細(xì)胞，還是在支持細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞都有它們 的存在，且與特殊的生精細(xì)胞時(shí)相門tage）有關(guān)。目前有關(guān) TGF－ p超家族成員在精子發(fā)生和發(fā)育過程中的作用還不清楚，因此從 其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的下游分子Smads的研究入手，進(jìn)一步弄清其作用機(jī) 理和途徑尤為重要。本研究分別取自出生后3天、7天、14天、 2 —— 28天和成年的健康雄性S＊大鼠睪丸，應(yīng)用免疫組織化學(xué)ABC 法結(jié)合葡萄糖氧化酶－DAB－硫酸鎳鉸增強(qiáng)技術(shù)，檢測發(fā)育不同階 段大鼠摹丸Smadl、SmadZ、Smad4和Smads蛋白的定位和發(fā)育 變化，并通過圖像分析技術(shù)對免疫組織化學(xué)結(jié)果進(jìn)行定量分析； 應(yīng)用抗CD 14一抗Smad4及抗SmadZ一抗Smad4雙重免疫染色技 術(shù)，檢測成年大鼠睪丸Smads蛋白的共存現(xiàn)象；應(yīng)用PAS反應(yīng)， 顯示成年大鼠睪丸生精上皮的不同時(shí)相（StageX應(yīng)用蛋白質(zhì)兔疫 印跡技術(shù)，檢測發(fā)育不同階段大鼠睪丸四種Smads蛋白的表達(dá)、 變化。 結(jié)果表明： 1．Smadl 在出主后14天大鼠睪丸的主精細(xì)胞中即可見兔疫 陽性反應(yīng)，胞核為陰性，支持細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞未見陽性反應(yīng)； Western－blots則從生后3天起，在發(fā)育的各個(gè)階段均有表達(dá)。 2．SmadZ從出生后7天起開始表達(dá)，免疫陽性產(chǎn)物位于各級(jí) 生精細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，支持細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞亦有陽性反應(yīng)； Western．blots結(jié)果從生后3天起，在大鼠睪丸發(fā)育的各個(gè)階段均 有表達(dá)。 3．Smad4的免疫組化及 Western－blots結(jié)果均顯示，發(fā)育各個(gè) 階段的間質(zhì)細(xì)胞中都有較強(qiáng)的表達(dá)，免疫陽性產(chǎn)物位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)， 而各級(jí)生精細(xì)胞則無陽性反應(yīng)。 4．Smads的免疫組化及Western－blots結(jié)果顯示，僅在28夭 和成年大鼠的間質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)有弱的表達(dá)，各級(jí)生精細(xì)胞未見陽 性反應(yīng)。 5．圖像分析及統(tǒng)計(jì)結(jié)果提示，Smadl、SmadZ、Smad4和Smads 蛋白均隨著大鼠宰丸的發(fā)育成熟有一個(gè)逐漸增多的變化趨勢。 3 一 6．PAS反應(yīng)及免疫組化結(jié)果提示，Smad、SmadZ蛋白表達(dá) 于各級(jí)生精細(xì)胞中，其陽性分布趨勢與生精小管的生精上皮所處 周期（Circle）的不同時(shí)相（Stage）有關(guān)。 由此我們的推論是： 1．Smads在促進(jìn)和維持睪丸組織的發(fā)育成熟、各種細(xì)胞的
【學(xué)位單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2001
【中圖分類】：R339.21

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2811518