睪丸是產生精子、維持性征的重要器官，出生后睪丸的發(fā)育成 熟、各種細胞的功能分化以及精子發(fā)生都受到諸如促性腺激素釋 放激素（GnRH）、促甲狀腺激素釋放激素（TRH）、胰島素樣生長 因子（IGFs）、內皮素（ET）、血管緊張素-Ⅱ（AT-Ⅱ）等多種肽 類因子的調控，其中轉化生長因子-β（Transforming growth factor β，TGF-β）超家族即是其中一類重要的睪丸功能局部調節(jié)因子。 TGF-β超家族是一個由分泌型的多肽分子，包括TGF-βs、活 化素（Activins）、抑制素（Inhibins）、骨形態(tài)形成蛋白（Bone morphogenetic proteins, BMPs）等構成的細胞因子超家族，在生物 機體及各個器官的發(fā)育過程中起重要的作用。TGF-β通過跨膜的 一 1型和＊型絲氨酸／蘇氨酸激酶受體形成異源受體復合物，并使I 型受體活化，通過Smads通路傳遞信號。Smads蛋白是近年發(fā)現(xiàn) 的TGFo超家族下游一類細胞內信號轉導分子，可將信號直接從 細胞膜轉導入細胞核內，具有轉錄活化的作用。Smads編碼42—60 kD的蛋白質，由兩段高度保守的氫基端和叛基端結構域（MH 和MHZ）和中間富含脯氨酸的高變連接區(qū)組成。根據(jù)其結構和功 能特性分為三類：第一類受體激活的Smads或通路限制性Smads （Receptor－regulated Smads，R－Smads／Pathway－restricted Smads）， 它們的 C端結構域末端含有一個保守的磷酸化位點 SS（V／M）S， 可與1型受體直接作用并被磷酸化。這一類Smads在特定的 TGFB超家族成員介導的信號轉導通路中發(fā)揮作用，如：BMPs 通過Smadl、Smads和Smads，TGFB和活化素通過SmadZ和 Smad3。第二類為通用的 Smads（Common－mediator Smads， Co．Smads），目前在脊椎動物發(fā)現(xiàn)的此類 Smad只有 Smad4。在它 的C端結構域沒有磷酸化位點，但它可與其它R－Smads相互作用 并形成穩(wěn)定的異源三聚體。這種異源三聚體的形成是信號得以轉 導所必需的。第三類為抑朱性 Smads（Inhibitory Smads，I－Smads）， 包括Smad6和Smad7，它們能夠通過阻斷R刁mads與受體或 Co．Smads的結合，對Smads的信號轉導通路發(fā)揮負調控作用。 目前已證實TGF p超家族成員及其受體在辜丸中均有表達， 無論是在分裂期生精細胞，還是在支持細胞、間質細胞都有它們 的存在，且與特殊的生精細胞時相門tage）有關。目前有關 TGF－ p超家族成員在精子發(fā)生和發(fā)育過程中的作用還不清楚，因此從 其信號轉導的下游分子Smads的研究入手，進一步弄清其作用機 理和途徑尤為重要。本研究分別取自出生后3天、7天、14天、 2 —— 28天和成年的健康雄性S＊大鼠睪丸，應用免疫組織化學ABC 法結合葡萄糖氧化酶－DAB－硫酸鎳鉸增強技術，檢測發(fā)育不同階 段大鼠摹丸Smadl、SmadZ、Smad4和Smads蛋白的定位和發(fā)育 變化，并通過圖像分析技術對免疫組織化學結果進行定量分析； 應用抗CD 14一抗Smad4及抗SmadZ一抗Smad4雙重免疫染色技 術，檢測成年大鼠睪丸Smads蛋白的共存現(xiàn)象；應用PAS反應， 顯示成年大鼠睪丸生精上皮的不同時相（StageX應用蛋白質兔疫 印跡技術，檢測發(fā)育不同階段大鼠睪丸四種Smads蛋白的表達、 變化。 結果表明： 1．Smadl 在出主后14天大鼠睪丸的主精細胞中即可見兔疫 陽性反應，胞核為陰性，支持細胞及間質細胞未見陽性反應； Western－blots則從生后3天起，在發(fā)育的各個階段均有表達。 2．SmadZ從出生后7天起開始表達，免疫陽性產物位于各級 生精細胞的胞質內，支持細胞及間質細胞亦有陽性反應； Western．blots結果從生后3天起，在大鼠睪丸發(fā)育的各個階段均 有表達。 3．Smad4的免疫組化及 Western－blots結果均顯示，發(fā)育各個 階段的間質細胞中都有較強的表達，免疫陽性產物位于細胞質內， 而各級生精細胞則無陽性反應。 4．Smads的免疫組化及Western－blots結果顯示，僅在28夭 和成年大鼠的間質細胞胞質內有弱的表達，各級生精細胞未見陽 性反應。 5．圖像分析及統(tǒng)計結果提示，Smadl、SmadZ、Smad4和Smads 蛋白均隨著大鼠宰丸的發(fā)育成熟有一個逐漸增多的變化趨勢。 3 一 6．PAS反應及免疫組化結果提示，Smad、SmadZ蛋白表達 于各級生精細胞中，其陽性分布趨勢與生精小管的生精上皮所處 周期（Circle）的不同時相（Stage）有關。 由此我們的推論是： 1．Smads在促進和維持睪丸組織的發(fā)育成熟、各種細胞的
【學位單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2001
【中圖分類】：R339.21

【參考文獻】

相關期刊論文 前7條

1 李曉萌;轉化生長因子β在睪丸內表達和調節(jié)的研究進展[J];國外醫(yī)學(計劃生育分冊);1999年03期

2 朱幫福;Smads分子及其介導的TGF-β超家族信號轉導[J];國外醫(yī)學(分子生物學分冊);1999年03期

3 萬秋紅;TGF-β超家族信號傳導機制研究進展[J];國外醫(yī)學(分子生物學分冊);2000年03期

4 汪娟,柳惠圖;TGF-β信號通路中Smad蛋白與基因轉錄調節(jié)研究進展[J];解剖學報;2000年S1期

5 劉慧雯，李村，金連弘，劉芷余，李學均;大鼠睪丸間質細胞發(fā)育的形態(tài)學研究及立體學定量分析[J];解剖學報;1995年04期

6 張平,王金泉;轉化生長因子-β族信號的轉導[J];生物化學與生物物理進展;2000年04期

7 楊曉,黃培堂,黃翠芬;Smads基因功能的研究進展[J];中國生物化學與分子生物學報;2000年02期

本文編號：2811518