【摘要】： 本文研究了變性蛋白質(zhì)在不同種類液相色譜上的復(fù)性情況。分別用高效疏水色譜(HPHIC)和高效離子交換色譜(HPIEC)對(duì)鹽酸胍、尿素、SDS變性的11種蛋白質(zhì)進(jìn)行了復(fù)性和保留行為的研究。11種蛋白質(zhì)中有5種可以在HPHIC上得到復(fù)性。結(jié)果顯示：其中分子量小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的蛋白質(zhì)復(fù)性效果好，分子量大、含有輔基、結(jié)構(gòu)復(fù)雜的復(fù)性效果差。復(fù)性效果好的蛋白質(zhì)不僅復(fù)性效率高，而且保留時(shí)間、峰型及Z值均與天然蛋白相似。鹽酸胍變性的蛋白質(zhì)復(fù)性后的質(zhì)量回收率和活性回收率均高于尿素，SDS變性的蛋白質(zhì)構(gòu)象難以恢復(fù)，復(fù)性效果最差。在HPIEC上，復(fù)性的蛋白質(zhì)也表現(xiàn)出相似的結(jié)果。但是只有3種蛋白獲得復(fù)性，而且質(zhì)量和活性回收率普遍低于HPHIC，Z值、保留時(shí)間雖然與天然蛋白相近，但峰型相對(duì)較差，復(fù)性條件的選擇也較HPHIC困難。蛋白質(zhì)在疏水作用色譜上的復(fù)性效果優(yōu)于離子交換色譜。 其次，我們又用二硫蘇糖醇(DTT)將胍變及脲變核糖核酸酶(RNase)的二硫鍵打斷，加入氧化型谷胱苷肽(GSSG)，然后用HPHIC、HPIEC和排阻色譜(SEC)對(duì)其進(jìn)行復(fù)性。對(duì)二硫鍵斷裂的RNase在三種色譜上的復(fù)性效果進(jìn)行比較的同時(shí)，還研究了色譜固定相、變性劑、氧化-還原劑對(duì)復(fù)性的 第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文 影響。研究發(fā)現(xiàn)：三種色譜固定相均對(duì)RNase的復(fù)性有所貢獻(xiàn)。RNase在 HPHI、HPIEC上的質(zhì)量和活性回收率高于SEC。用三種色譜法對(duì)RNase進(jìn) 行復(fù)性時(shí)，在流動(dòng)相中加人低濃度的變性劑門刀mow GuHCI或ZomollL Uea），可以提高RNase的復(fù)性效率。也可以通過(guò)選擇合適的氧化劑、還原劑 的比例提高復(fù)性效率，如狐變RNase在Dry與GSSG的濃度比為1：2＊， 腺變RNase為1：2七時(shí)，RNase的質(zhì)量和活性回收率較高。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號(hào)】：R341

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本文編號(hào)：2805787