【摘要】： 目的：利用合成的肽片段鑒定視網(wǎng)膜抗原中的MHCI類(lèi)分子H-2~b限制性表位。方法：首先利用計(jì)算機(jī)技術(shù)預(yù)測(cè)感光器間類(lèi)視網(wǎng)膜結(jié)合蛋白(Interphotoreceptor retinoid-binding protein，IRBP)、S-抗原(Soluble retinal antigen，S-Ag)，恢復(fù)蛋白，Phosducin和色素上皮細(xì)胞衍生因子(Pigment epithelium-derived factor，PEDF)中的MHCⅠ類(lèi)分子H-2~b限制性肽片段，隨后用肽結(jié)合試驗(yàn)聯(lián)合流式細(xì)胞儀分析選擇的肽片段與MHCⅠH-2~b分子的親和力。將這些肽片段分別與不完全弗氏佐劑制備成乳濁液，皮下注射免疫C57BL/6小鼠，8天后，處死小鼠，取出脾臟制備脾細(xì)胞懸液。在體外用γ射線(xiàn)滅活的相應(yīng)肽致敏的未免疫同系小鼠脾細(xì)胞與之培養(yǎng)5天，以刺激CTLs增殖。相應(yīng)肽標(biāo)記的RMA-S細(xì)胞(TAP缺陷H-2~(b+)細(xì)胞)與鉻孵育1小時(shí)，作為靶細(xì)胞，用~(51)Cr釋放試驗(yàn)檢測(cè)CTLs活性。結(jié)果：體外試驗(yàn)表明所有選擇的肽均能上調(diào)且穩(wěn)定MHCⅠ類(lèi)分子在RMA-S細(xì)胞表面的表達(dá)，其中五種肽片段，IRBP來(lái)源的肽片段：Q-8-L(QAPVLTNL)、I-8-L(ISYEPSTL)和PEDF來(lái)源的肽片段：L-9-L(LNQPFLFVL)、S-9-L(SRIVFERKL)和S-8-L(SIIFFLPL)在體內(nèi)能夠誘導(dǎo)特異性CTLs應(yīng)答，而其它17種肽片段，包括S-抗原，恢復(fù)蛋白和Phosducin等來(lái)源的肽片段則不能誘導(dǎo)出特異性CTLs活性。結(jié)論：IRBP來(lái)源的肽片段：Q-8-L和I-8-L以及PEDF來(lái)源的肽片段：L-9-L、S-9-L和S-8-L能夠在C57BL/6小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生CTLs活性，表明Q-8-L和I-8-L以及L-9-L、S-9-L和S-8-L可分別作為IRBP和PEDF中具有免疫原性的MHCⅠH-2~b限制性的肽抗原。這些具有免疫原性的CTLs特異性表位的發(fā)現(xiàn)將有助于我們對(duì)免疫源性匍萄膜炎發(fā)病機(jī)制的進(jìn)一步了解。本研究也為尋找腫瘤抗原中具有誘導(dǎo)特異性CTLs能力的肽片段提供了一種策略，為制備肽片段腫瘤疫苗提供了理論基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類(lèi)號(hào)】：R392

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