發(fā)布時間：2020-08-11 11:22

【摘要】： 受精過程包括精子成熟、附著、結(jié)合、頂體反應(yīng)、穿卵、融合、皮質(zhì)反應(yīng)、雙方配子的帶反應(yīng)和核聚變等過程，而抗精子抗體可通過降低精子速度、減少頂體反應(yīng)率、抑制精卵結(jié)合等途徑來影響精子受精功能，導(dǎo)致免疫性不孕。利用精子抗原來制作避孕疫苗，已成為免疫避孕的研究熱點。 精子蛋白SP17位于精子頂體部位，與精子頂體跨膜蛋白Cyritestin一樣，均在精-卵透明帶結(jié)合、精-卵膜結(jié)合和融合過程中發(fā)揮重要作用。本研究利用已經(jīng)獲得的含SP17和Cyritestin表位的人工合成35肽（P3肽）和抗P3肽兔血清，探討抗P3抗體與人精子的結(jié)合和對受精過程的影響及其程度，評價人工合成的P3肽對人精子功能的影響，旨在對其生物學(xué)特性進(jìn)行深入研究。 實驗分兩部分進(jìn)行。第一部分運用試劑盒，將P3多肽通過EDC與KLH載體蛋白結(jié)合，免疫BALB/C小鼠，收獲血清經(jīng)過柱純化，獲得抗P3抗體，用FITC直接標(biāo)記，通過流式細(xì)胞儀檢測抗體與精子結(jié)合的陽性率，即抗體與人精子的結(jié)合率，用熒光顯微鏡觀察抗體與人精子的結(jié)合部位，并且采用免疫組化方法，以抗Cyritestin單抗為陽性對照，觀察含抗P3抗體的兔血清與人精子的結(jié)合部位。第二部分將人精子與含抗體血清共同孵育，利用CASA系統(tǒng)檢測人精子活動力，用FITC-PSA法及考馬斯亮藍(lán)法檢測頂體反應(yīng)率，通過SPA法檢測穿卵率，評價抗體對人精子功能的影響及其程度。 抗體經(jīng)純化、標(biāo)記后與精子表面的結(jié)合率可達(dá)97.7%，抗體血清與人精子孵育后，用羊抗人IgG檢測陽性率從49.2%降至36.4%，熒光顯微鏡見精子頭頸部著色，部分見赤道板或頂端熒光增強，免疫組化染色見精子頭部著深褐色，與陽性對照一致�？贵w血清與人精子孵育后運動速度、各項運動精子百分率及其他各項指標(biāo)均顯著下降，并且與抗體濃度變化有一定關(guān)系， WP=7 精子頂體反應(yīng)率及穿卵率也顯著下降。 結(jié)論：P3肽在精子頭部表面有表達(dá)，特異性抗P3抗體可與其高度結(jié)合；抗P3抗體可顯著影響精子的活動力、頂體反應(yīng)和穿卵率，可干擾精子受精功能，因此P3肽對人精子受精功能有影響，具有一定的開發(fā)前景。
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號】：R392
【圖文】：

1 抗體的獲得純化和檢測獲得的 P3-KLH 約為 500 g/ml 純化后的特異性抗 P3 抗體的最大 A28為 1.5416 用 FITC 標(biāo)記后測 A280為 1.5570 A495為 0.0919 利用公式 Igmg/ml =[A280- 0.35 A495]/1.4 計算 IgG 濃度為 1.089mg/ml 約計為 1mg/ml2 流式細(xì)胞儀檢測結(jié)合率所有二維點圖見細(xì)胞多密集于左下角 見圖 1-1 其余直方圖見圖 1-23 4 5 6 計算 a b c d e 五管陽性率分別為 2.01% 49.2% 97.7%36.4% 8.45% 說明 P3 肽在精子細(xì)胞表面有高度表達(dá) 抗 P3 抗體制備純化和標(biāo)記較成功 且該抗體與人精子表面可高度特異結(jié)合

1 抗體的獲得純化和檢測獲得的 P3-KLH 約為 500 g/ml 純化后的特異性抗 P3 抗體的最大 A28為 1.5416 用 FITC 標(biāo)記后測 A280為 1.5570 A495為 0.0919 利用公式 Igmg/ml =[A280- 0.35 A495]/1.4 計算 IgG 濃度為 1.089mg/ml 約計為 1mg/ml2 流式細(xì)胞儀檢測結(jié)合率所有二維點圖見細(xì)胞多密集于左下角 見圖 1-1 其余直方圖見圖 1-23 4 5 6 計算 a b c d e 五管陽性率分別為 2.01% 49.2% 97.7%36.4% 8.45% 說明 P3 肽在精子細(xì)胞表面有高度表達(dá) 抗 P3 抗體制備純化和標(biāo)記較成功 且該抗體與人精子表面可高度特異結(jié)合

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

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3 陳欣潔,孫筱放;人精子體外獲能最佳時間的選擇[J];生殖與避孕;1998年06期

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本文編號：2789006