【摘要】： 枯否細(xì)胞(Kupffer cells，KC)是機(jī)體拮抗內(nèi)外源性感染的主要防御細(xì)胞，同時(shí)，KC作為局部和全身性炎癥反應(yīng)的重要效應(yīng)細(xì)胞，在膿毒癥肝損傷的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。近年研究表明，核轉(zhuǎn)錄因子在內(nèi)毒素(Endotoxins，ET)誘發(fā)炎癥反應(yīng)過(guò)程中具有重要的調(diào)控作用，其對(duì)炎癥的調(diào)控主要通過(guò)調(diào)控炎性細(xì)胞因子的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)，其中KC中的主要轉(zhuǎn)錄因子是核因子-κB(Nuclear factor-κB，NF-κB)和活化蛋白-1(Activator protein-1，AP-1)。本研究采用凝膠電泳遷移率變動(dòng)分析法(Electrophoretic mobility shift assay，EMSA)和酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)來(lái)探討：1．KC中NF-κB和AP-1在內(nèi)毒素肝損傷過(guò)程中活性的動(dòng)態(tài)變化及吡咯啉烷二硫代氨基甲酸鹽(Pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC)對(duì)其活性的影響。2．內(nèi)毒素肝損傷過(guò)程中，肝組織中促炎細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-6(Interleukin-6，IL-6)水平的動(dòng)態(tài)變化，PDTC對(duì)其釋放量的影響及其與NF-κB、AP-1活性的關(guān)系。通過(guò)上述研究，旨在從分子水平上探討內(nèi)毒素誘發(fā)炎癥反應(yīng)過(guò)程中，KC內(nèi)主要轉(zhuǎn)錄因子NF-κB、AP-1活性的變化規(guī)律及其在促炎細(xì)胞因子IL-6基因表達(dá)中的調(diào)控作用，以明確調(diào)控炎癥介質(zhì)相關(guān)基因表達(dá)中的關(guān)鍵調(diào)控元件，從而為有效控制炎癥提供一個(gè)切入點(diǎn)。 主要結(jié)果與結(jié)論如下： 1．采用EMSA檢測(cè)內(nèi)毒素所致小鼠肝損傷過(guò)程中NF-κB活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，KC中NF-κB活性與LPS處理3h的量效關(guān)系為：1mg/kg LPS組即可觀察到NF-κB活性，5mg/kg LPS組達(dá)峰值，10mg/kg LPS組仍可維持高活化狀態(tài)；用5mg/kgLPS處理后的時(shí)效關(guān)系為：0.5h即可檢測(cè)到NF-κB活性，3h活性明顯增強(qiáng)，并可持續(xù)到至少8h；PDTC對(duì)NF-κB活性有明顯抑制作用。 2．采用EMSA檢測(cè)內(nèi)毒素所致小鼠肝損傷過(guò)程中AP-1活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，KC中AP-1活性與LPS處理3h的量效關(guān)系為：1mg/kg LPS組即可檢測(cè)到AP-1活性，5mg/kg LPS組活性與1mg/kg LPS組相比稍有減弱，10mg/kg LPS組又明顯 增強(qiáng)，三劑量組n上活性與對(duì)照組相比均顯著增強(qiáng)；用sing／kgLPS處理后的時(shí) 效關(guān)系為：0．sh即可檢測(cè)到 AP－1活性，lh達(dá)峰值，3h減弱后，5 h增強(qiáng)，sh又 有所減弱，表現(xiàn)出明顯的波動(dòng)現(xiàn)象，但各時(shí)相點(diǎn)AP－l活性均顯著強(qiáng)于對(duì)照；PDTC 對(duì)AP活性有明顯促進(jìn)作用。 3．本研究還進(jìn)一步采用ELISA測(cè)定了內(nèi)毒素所致肝損傷過(guò)程中，肝組織內(nèi) IL－6水平的動(dòng)態(tài)變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，內(nèi)毒素的不同劑量和作用的不同時(shí)間肝組織內(nèi) IL－6水平均表現(xiàn)為先升高后降低的變化趨勢(shì)，且各處理組均明顯高于正常對(duì)照； PDTC能明顯抑制IL．6的釋放。相關(guān)分析顯示IL6水平的變化與NFxB活性變 化呈顯著正相關(guān)，與AP－l活性變化則無(wú)明顯相關(guān)性。提示，NFth對(duì)IL－6的表 達(dá)可能具有一定的調(diào)控作用，而AP－l可能并不參與IL七表達(dá)的調(diào)控。 4．本研究結(jié)果表明，PDTC作為一種抗氧化劑，能通過(guò)抑制LPS引起的NF－h(huán) 的活化過(guò)程而阻斷炎性細(xì)胞因子IL－6基因的表達(dá)，因而抗氧化劑有可能成為炎癥 疾病治療中一類很有應(yīng)用前景的藥物。
【學(xué)位授予單位】：西南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2001
【分類號(hào)】：R363

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2781213