【摘要】：本實(shí)驗(yàn)從未經(jīng)促性腺激素刺激的多囊卵巢綜合征(PCOS)患者的卵巢皮質(zhì)層小卵泡穿刺獲得未成熟卵，并對其體外成熟、受精和早期胚胎發(fā)育進(jìn)行了初步研究。結(jié)果顯示，在相同的體外成熟培養(yǎng)條件下，與經(jīng)激素刺激的未成熟卵相比，未經(jīng)刺激的未成熟卵體外成熟率(71.88％)、受精率(60.87％)、卵裂率(82.14％)和受精后第三天的優(yōu)質(zhì)胚胎率(6.52％)均較低，其中正常受精率和優(yōu)質(zhì)胚胎率有顯著性差異(P值分別為0.023和0.000)。未經(jīng)刺激的未成熟卵受精后胚胎發(fā)育分別停滯于早期胚胎發(fā)育的各個(gè)時(shí)期，特別是2～8細(xì)胞期，最終只有極少部分能發(fā)育至桑葚胚和囊胚(分別為10.87％和6.52％)。結(jié)果提示，取卵前是否經(jīng)過促性腺激素刺激對人未成熟卵的核成熟無顯著影響，未經(jīng)刺激的未成熟卵經(jīng)過體外成熟培養(yǎng)，可以重新啟動(dòng)第一次減數(shù)分裂，完成核成熟，并休止于M-Ⅱ期。但是，未經(jīng)刺激的未成熟卵成熟后的受精率和胚胎發(fā)育能力低，細(xì)胞質(zhì)的成熟問題可能是造成這一現(xiàn)象的主要原因。另外，本研究的IVMM做為一種單一的培養(yǎng)液，不能完全模擬生理?xiàng)l件下卵母細(xì)胞發(fā)育的各個(gè)階段所處的環(huán)境。應(yīng)該根椐培養(yǎng)前卵母細(xì)胞的成熟度和其卵泡的發(fā)育狀態(tài)選用不同成分的培養(yǎng)液分階段成熟培養(yǎng)，以利于卵母細(xì)胞的充分成熟。 為了尋找能預(yù)示卵母細(xì)胞受精和胚胎發(fā)育能力的形態(tài)標(biāo)記，ICSI前依據(jù)第一極體和卵周隙的形態(tài)以及細(xì)胞質(zhì)有無內(nèi)容物，對卵母細(xì)胞進(jìn)行分組，比較各組間的受精率和卵裂率以及移植當(dāng)天的優(yōu)質(zhì)胚胎率。研究發(fā)現(xiàn)，不同極體和卵周隙形態(tài)的卵母細(xì)胞ICSI后受精率有顯著差異(P=0.044)；無細(xì)胞質(zhì)內(nèi)容物的卵母細(xì)胞其受精后的優(yōu)質(zhì)胚胎率顯著高于有內(nèi)容物的卵母細(xì)胞(P=0.011)。因此推測，卵母細(xì)胞的第一極體形態(tài)和卵周隙大小反映了卵母細(xì)胞的成熟度，受精前觀察卵母細(xì)胞第一極體和卵周隙的形態(tài)可以預(yù)測ICSI后的受精能力。卵周隙正常，第一極體完整、形態(tài)不規(guī)則的卵母細(xì)胞成熟度最理想，ICSI后受精率最高。而卵母細(xì)胞中有無細(xì)胞質(zhì)內(nèi)容物與其細(xì)胞質(zhì)成熟度相 南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 關(guān)，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)容物可能提示卵母細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)不熟或過熟，對預(yù)測受精 后早期胚胎發(fā)育的能力具有重要價(jià)值。 我們對人囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)的分離、胚胎千細(xì)胞的培養(yǎng)條件和傳代方 法進(jìn)行了初步探討。本研究用于人ES細(xì)胞系建系的胚胎主要來源于 臨床WF或ICSI周期中的廢棄胚胎，其發(fā)育能力較差。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)， 胚胎質(zhì)量與原代集落的形成密切相關(guān)，囊胚形成率低、質(zhì)量差，是限 制建系成功的主要因素之一。我們嘗試用免疫手術(shù)法和培養(yǎng)法分離內(nèi) 細(xì)胞團(tuán)，實(shí)驗(yàn)顯示免疫手術(shù)法分離內(nèi)細(xì)胞團(tuán)的效率優(yōu)于培養(yǎng)分離法。 將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)種植于胎鼠成纖維細(xì)胞制備的飼養(yǎng)層上，培養(yǎng)于含有胎牛 血清、日一筑基乙醇、非必需氨基酸、谷胺酸氨、核普酸和堿性成纖 維細(xì)胞生長因子和白血病抑制因子的培養(yǎng)液中。該培養(yǎng)系統(tǒng)能夠從形 態(tài)上支持囊胚細(xì)胞增殖并維持未分化，形成原代集落，并傳至2一3 代。理想的傳代方法和完善的體外培養(yǎng)系統(tǒng)是胚胎干細(xì)胞成功建系的 兩個(gè)關(guān)健因素。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R321

【引證文獻(xiàn)】

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1 蔣春艷;人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)卵巢功能的實(shí)驗(yàn)研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2014年

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本文編號：2778130