【摘要】： 自1980年Furchgott發(fā)現(xiàn)乙酰膽堿(Acetylcholine,ACh)可通過內(nèi)皮釋放一種舒張因子(EDRF)，使預(yù)先收縮的免主動(dòng)脈環(huán)松弛以來，人們對內(nèi)皮源性血管張力調(diào)節(jié)機(jī)制進(jìn)行了廣泛的研究，現(xiàn)已證實(shí)，EDRF便是一氧化氮(NO)。除EDRF外，80年代末Weston和Suzuki等發(fā)現(xiàn)ACh等血管活性物質(zhì)還可使血管內(nèi)皮釋放一種可使SMC膜電位超極化的因子(EDHF)。EDHF介導(dǎo)的血管舒張不受血紅蛋白和亞甲藍(lán)的影響，說明其作用機(jī)制與NO無關(guān)。EDHF的性質(zhì)尚未確定，有的研究認(rèn)為其與EC的K~+通道有關(guān)，而有的研究認(rèn)為平滑肌的內(nèi)皮源性超極化與EC和SMC之間的縫隙連接(gap junction)有關(guān)，因?yàn)閮烧咄ㄟ^縫隙連接有著電偶聯(lián)作用。本文利用細(xì)胞共培養(yǎng)和膜片鉗技術(shù)，探討縫隙連接在血管張力調(diào)節(jié)中的作用。 1．EC和SMC共培養(yǎng)模型建立 采用微孔多聚碳酸酯濾膜(polycarbonste filter membranc)作為載體，將牛主動(dòng)脈EC和家兔主動(dòng)脈SMC接種于孔膜的兩側(cè)，建立EC和SMC聯(lián)合培養(yǎng)模型，模擬血管壁EC和SMC間的結(jié)構(gòu)關(guān)系。結(jié)果：共培養(yǎng)的EC呈單層生長，而SMC呈多層生長，同類和異類細(xì)胞間都有縫隙連接形成，縫隙連接的形成與培養(yǎng)的時(shí)間有關(guān)，在SMC接種后24h，EC通過微孔與SMC形成縫隙連接。此種EC和SMC共培養(yǎng)模型模擬了在體時(shí)EC和SMC之間的結(jié)構(gòu)關(guān)系，可以用來研究兩種細(xì)胞間的相互影響。 第回軍巴大學(xué)項(xiàng)士學(xué)位論又 2、ACh對培養(yǎng)的牛主動(dòng)脈EC電生理學(xué)影響 利用常規(guī)全細(xì)胞記錄方式（whole－cell patCh Clamp），測得EC靜 息電位呈現(xiàn)兩個(gè)峰值，分別在刁2 f 7InV（n—42）和I2士 5（n—6）處， 膜電流主要為一內(nèi)向整流性 K”電流。10 k M ACh可致牛主動(dòng)脈 EC膜 電位產(chǎn)生超極化；可引起牛主動(dòng)脈EC產(chǎn)生一個(gè)外向電流。ACh這一 作用可被鈣激活鉀通道（Kc＊阻斷劑 TEA mM抑制。結(jié)果提示：在靜 息狀態(tài)下，牛主動(dòng)脈＊C膜上的主要通道是內(nèi)向整流性義通道：＊＊h 致EC超極化，該超極化作用可能與K。；；的廠放有關(guān)。 3、ACh對家兔主動(dòng)脈SMC電生理學(xué)影響 采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)觀察家兔主動(dòng)脈SMC上的鉀通道活動(dòng)情 況；并探討了 ACh對 SMC膜電位和鉀電流的作用。結(jié)果：用全細(xì)胞 膜片鉗記錄的電流鉗制方式測得家兔主動(dòng)脈SMC的靜息膜電位為－45 土smV（n—27）。觀察到SMC上主要存在的鉀通道電流為Kc。，對TEA 門）敏感，對 4AP門）不敏感。l和 10卜M ACh對該通道 電流和膜電位均無作用。 4、ACh對與EC共培養(yǎng)的SMC電生理功能的影響 mvMAC卜可致家兔主動(dòng)脈SMC膜電位產(chǎn)生一超極化作用，該 超極化作用不受NO合成酶阻斷劑硝基精氨酸隊(duì)－NNA，100卜M）的影 響，但這一作用可被 lmM TEA或維隙連接阻斷劑 40 u MIS p－甘草 次酸 門sc－g燈C廠rhchnjC。［ChI，IHo－（A）抑制。表明：＊＊h對S＊C 產(chǎn)生內(nèi)皮源性超極化作用可能與SMC上KC。廠放有關(guān)，且該內(nèi)皮源性 超極化作用與EC與SMC之間的縫隙連接有密切的關(guān)系。 －3 第口二匠大學(xué)阿士拿位論文 結(jié)論：建立的以微孔聚碳酸酯膜為載體的EC與SMC共培養(yǎng)模型， 該模型可以模擬在體時(shí)血管內(nèi)皮和平滑肌細(xì)胞間的組織結(jié)構(gòu)關(guān)系。 ACh可以導(dǎo)致牛主動(dòng)脈EC膜電位超極化，以及引出一外向電流，此 變化均與KC。有關(guān)。而ACh對培養(yǎng)的家兔主動(dòng)脈SMC的膜電位和鉀 通道都沒有作用：當(dāng)EC與SMC共培養(yǎng)時(shí)，ACh可致家兔主動(dòng)脈SMC 膜電位產(chǎn)生內(nèi)皮依賴性超極化，ik作用與內(nèi)皮釋放的N O無關(guān)，可被 鈣激活 K”通道（KQ）阻斷劑 TEA和縫隙連接阻斷劑部分阻斷。實(shí)驗(yàn) 結(jié)果提示ACh對與EC共培養(yǎng)的SMC影響可能與EC膜上的KC。激活 有關(guān)，之后＊C通過＊C與S＊C問的縫隙連接直接將電信號傳遞給 SMC，引起SMC膜上的Kc。廠放，仗SMC超極化，繼而引起血管的 舒張反應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號】：R33

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 宋錦t

本文編號：2778148