本文關(guān)鍵詞：白細(xì)胞介素35的蛋白表達(dá)與純化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：白細(xì)胞介素是人體中參與免疫作用的細(xì)胞因子,具有十分重要的生理功能。白細(xì)胞介素家族成員眾多,其中白細(xì)胞介素35(Interleukin-35,IL-35)是一種非常重要的由異源二聚體組成的抑制性細(xì)胞因子,屬于白細(xì)胞介素12家族。在免疫調(diào)控中發(fā)揮重要作用,IL-35的研究會(huì)涉及很多炎癥的徹底治愈,機(jī)體的免疫耐受性,和自身免疫疾病的治療等許多方面。白細(xì)胞介素35作為最新的抑制性細(xì)胞因子,蛋白結(jié)構(gòu)未知成為了后續(xù)研究的限制性因素。本研究旨在獲得適合晶體解析的白細(xì)胞介素35及其受體的蛋白,構(gòu)建了原核表達(dá)系統(tǒng)中適合表達(dá)白細(xì)胞介素35單個(gè)亞基克隆表達(dá)載體以及真核細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)中適合表達(dá)白細(xì)胞介素35單個(gè)亞基和融合蛋白的克隆表達(dá)載體,使白細(xì)胞介素35及其受體gp130可以穩(wěn)定表達(dá)。在原核表達(dá)系統(tǒng)中純化了包涵體蛋白及可溶蛋白,包涵體蛋白復(fù)性失敗,純化可溶蛋白能夠獲得目的蛋白。真核表達(dá)系統(tǒng)中,昆蟲細(xì)胞Sf21細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞293T細(xì)胞中無法進(jìn)行白細(xì)胞介素35單個(gè)亞基的表達(dá),融合蛋白表達(dá)量過低,僅在蛋白質(zhì)印跡法中可檢測(cè)。昆蟲細(xì)胞High Five中白細(xì)胞介素35的α鏈亞基p35,β鏈亞基受體蛋白gp130獲得了較好的表達(dá)。在獲取目的蛋白的過程中,首先采用了親和層析完成了對(duì)蛋白的初步提取,將得到的初步提取的蛋白進(jìn)行了離子交換層析,凝膠過濾層析柱分離雜蛋白,本研究最終獲得了均一、穩(wěn)定、折疊良好的白細(xì)胞介素35α鏈亞基IL12α-p35、β鏈亞基EBI3(Epstein-Barr virus-induced gene 3),β鏈亞基受體gp130的蛋白,為后續(xù)的晶體學(xué)研究奠定基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：白細(xì)胞介素35 克隆表達(dá)載體的構(gòu)建 原核表達(dá)系統(tǒng) 真核表達(dá)系統(tǒng) 蛋白表達(dá)與純化
【學(xué)位授予單位】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R392;Q78
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 第1章 前言8-21
• 1.1 課題背景及研究的目的和意義8
• 1.2 國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀分析8-12
• 1.2.1 Interleukin簡(jiǎn)介8-9
• 1.2.2 Interleukin-35的發(fā)現(xiàn)及其研究進(jìn)展9-12
• 1.2.3 Interleukin-35受體研究進(jìn)展12
• 1.3 蛋白質(zhì)的穩(wěn)定表達(dá)及分離純化12-19
• 1.3.1 真核細(xì)胞中分泌蛋白表達(dá)純化14-16
• 1.3.2 原核細(xì)菌中胞內(nèi)可溶蛋白的蛋白表達(dá)純化16-17
• 1.3.3 原核細(xì)菌中包涵體蛋白表達(dá)純化17-19
• 1.4 蛋白表達(dá)純化與結(jié)構(gòu)生物學(xué)19-20
• 1.5 本文的主要研究?jī)?nèi)容20-21
• 1.5.1 Interleukin-35克隆表達(dá)載體的構(gòu)建20
• 1.5.2 Interleukin-35蛋白的表達(dá)與純化20-21
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)方法21-33
• 2.1 引言21
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料21-24
• 2.2.1 質(zhì)粒和菌株21
• 2.2.2 分子生物學(xué)相關(guān)的生化試劑21
• 2.2.3 蛋白表達(dá)純化所需試劑21-23
• 2.2.4 實(shí)驗(yàn)儀器23-24
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法24-32
• 2.3.1 克隆表達(dá)載體的構(gòu)建24-26
• 2.3.2 重組質(zhì)粒鑒定與測(cè)序26-28
• 2.3.3 真核表達(dá)系統(tǒng)蛋白表達(dá)的檢測(cè)28-30
• 2.3.4 蛋白的原核表達(dá)及純化30-32
• 2.4 本章小結(jié)32-33
• 第3章 白細(xì)胞介素 35 克隆表達(dá)載體的構(gòu)建33-47
• 3.1 引言33
• 3.2 真核表達(dá)載體的構(gòu)建33-43
• 3.2.1 單個(gè)蛋白真核表達(dá)載體的構(gòu)建33-40
• 3.2.2 融合蛋白表達(dá)載體的構(gòu)建40-43
• 3.3 原核克隆表達(dá)載體的構(gòu)建43-46
• 3.4 本章小結(jié)46-47
• 第4章 白細(xì)胞介素35蛋白的表達(dá)與純化47-61
• 4.1 引言47
• 4.2 單個(gè)蛋白的真核表達(dá)純化47-52
• 4.3 融合蛋白的真核表達(dá)純化52-53
• 4.4 原核蛋白的表達(dá)純化53-60
• 4.4.1 包涵體蛋白表達(dá)純化55-57
• 4.4.2 原核可溶蛋白的純化57-60
• 4.5 本章小結(jié)60-61
• 結(jié)論61-62
• 參考文獻(xiàn)62-66
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文及其它成果66-68
• 致謝68

【共引文獻(xiàn)】

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