【摘要】：本文采用免疫治療方法探討阿片類物質(zhì)濫用的防治。用琥珀酸酐法合成6位琥珀酰嗎啡(M-6-S)，將嗎啡及M-6-S在碳二亞胺(EDCI)催化下，分別與大分子載體蛋白結(jié)合，形成嗎啡-載體蛋白交聯(lián)疫苗，并與佐劑混合免疫動(dòng)物，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)嗎啡的特異性抗體。對(duì)免疫動(dòng)物及其抗血清的性質(zhì)綜合評(píng)價(jià)，初步進(jìn)行嗎啡疫苗及抗嗎啡抗體制備的實(shí)驗(yàn)研究。 1．嗎啡疫苗的制備：鹽酸嗎啡制備嗎啡堿，收率為83.2％，嗎啡堿制備M-6-S，收率為64％；薄層層析法(TLC)鑒別M-6-S與嗎啡，嗎啡的比移值(R_f)為0.56，M-6-S的R_f為0.14；紫外吸收光譜(UV)鑒別M-6-S與嗎啡，兩者的UV光譜有所差異，但較難區(qū)分；酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)四種嗎啡交聯(lián)疫苗的抗原性，其中嗎啡直接交聯(lián)疫苗(M-BC)與其它三種琥珀�；宦�(lián)疫苗同樣具有良好的抗原性。 2．嗎啡疫苗的免疫學(xué)評(píng)價(jià)：ELISA法檢測(cè)免疫小鼠血清中抗體的滴度，6-琥珀酰嗎啡-BSA組(M-6-S-BSA)血清抗體效價(jià)較高，嗎啡-BC組(M-BC)、6-琥珀酰嗎啡-BC組(M-6-S-BC)的抗體效價(jià)維持時(shí)間較長(zhǎng)，四種嗎啡疫苗均具有較好的免疫原性；競(jìng)爭(zhēng)抑制實(shí)驗(yàn)中，嗎啡及海洛因均能抑制兩組(M-BC、M-6-S-BC)抗血清與包被抗原(M-6-S-BSA)的結(jié)合，并呈劑量依賴性，證明嗎啡疫苗同時(shí)具有抗海洛因的作用；交叉反應(yīng)實(shí)驗(yàn)顯示，阿片類物質(zhì)均能抑制抗血清與包被抗原的結(jié)合，而非阿片類物質(zhì)無此抑制作用。 3．嗎啡疫苗的藥理學(xué)評(píng)價(jià)：在納洛酮催促戒斷實(shí)驗(yàn)中，與嗎啡模型組相比，6-琥珀酰嗎啡-KLH組(M-6-S-KLH)的跳躍次數(shù)顯著降低(P＜0.05)，M-6-S-BSA組無顯著差別(P＞0.05)；M-BC及M-6-S-BC組的跳躍潛伏期延長(zhǎng)(P＜0.05)，跳躍次數(shù)明顯減少(P＜0.01)，體重減輕有所改善；大劑量嗎啡依賴模型中，免疫接種小鼠的體重及跳躍次數(shù)與模型組比較無明顯差異(P＞0.05)，跳躍潛伏期差異顯著(P＜0.05)，說明免疫療法中和嗎啡的能力有限；小鼠0.6％冰醋酸致痛模型中，與嗎 啡治療組相比，免疫接種小鼠使嗎啡的鎮(zhèn)痛作用效果減弱，其差異顯著 (尸0.05)，說明免疫小鼠體內(nèi)產(chǎn)生抗體，可阻斷嗎啡進(jìn)入大腦，減弱其 鎮(zhèn)痛作用;放免分析測(cè)定免疫接種的嗎啡依賴小鼠血清和腦組織中嗎啡 含量，與模型組比較，血清中嗎啡濃度變化不顯著，腦組織中嗎啡濃度 顯著降低(P0.01);免疫接種小鼠與正常小鼠的體重及各臟器重量比較 無顯著差異;疫苗連續(xù)給藥，納洛酮催促戒斷后，與模型組比較，疫苗 接種組的戒斷癥狀較輕(P0.OI)，其成癮性較低。 4.抗嗎啡多克隆與單克隆抗體的制備與鑒定:免疫家兔并采血，制 備抗嗎啡的多克隆抗體，抗血清效價(jià)可達(dá)到1:64000以上;親和層析純 化多抗，純化抗體的效價(jià)較高，可達(dá)到16一SOng;體外較高濃度 (20omg/nil)的嗎啡對(duì)純化抗體與包被抗原結(jié)合有抑制作用;納洛酮催 促實(shí)驗(yàn)中，低、高劑量的純化抗體對(duì)嗎啡戒斷癥狀有所影響;低、高劑 量純化抗體處理的嗎啡依賴小鼠腦組織中嗎啡的濃度，與模型組比較明 顯降低(P0.OI)。單克隆抗體的制備目前正在進(jìn)行第三次克隆化篩選， 有望于近期獲得穩(wěn)定分泌特異性單克隆抗體的細(xì)胞株。 結(jié)論:研制嗎啡依賴的防治疫苗，采用主動(dòng)免疫方式免疫動(dòng)物，誘 導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體，有效阻止嗎啡進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，從而減弱嗎 啡的藥理作用，降低其成癮性，此疫苗同時(shí)能對(duì)抗海洛因成癮，這將為 防止藥物濫用尋找新的治療方向。以此為研究基礎(chǔ)，制備抗嗎啡抗體， 為進(jìn)一步檢測(cè)疫苗的性質(zhì)及制備檢測(cè)試劑盒作準(zhǔn)備。
【學(xué)位授予單位】：第一軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2753055