【摘要】：采用L-苯丙氨酸為探針,研究了用芳環(huán)羥基化法(aromatic hydroxylation)檢測·OH的可行性。結(jié)果表明:使用液相色譜儀的熒光檢測器(FLD)和熒光分光光度計(jì)的熒光光譜(FS)兩種方法平行檢測Cu~(2+)-H_2O_2體系中產(chǎn)生的。試驗(yàn)采用的激發(fā)波長277nm,發(fā)射波長306nm。體系在反應(yīng)前后的熒光變化,可反映·OH產(chǎn)生量。對FLD與FS所得數(shù)據(jù)進(jìn)行了比較分析,結(jié)果顯示兩種方法具有較高一致性。由于FS使用混合體系檢測,易對熒光的產(chǎn)生造成干擾,故此法雖然經(jīng)濟(jì)簡便,但應(yīng)用范圍受到一定限制;而FLD法無上述干擾。同時(shí)使用HPLC—FLD檢測了7種過渡金屬離子參與類Fenton反應(yīng)產(chǎn)生·OH的能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Cr~(3+)、Fe~(2+)、Co~(2+)、Cu~(2+)、Pb~(2+)產(chǎn)生·OH的能力較強(qiáng),而Ni~(2+)和Cd~(2+)產(chǎn)生·OH的能力極弱。·OH清除劑脫鐵敏(desferrioxamine,DFO)或甘露醇,能明顯抑制產(chǎn)物L(fēng)-Tyr的熒光強(qiáng)度變化,說明·OH的產(chǎn)生受到抑制,結(jié)果表明HPLC方法準(zhǔn)確可靠。使用分光光度法對上述離子參與類Fenton反應(yīng)產(chǎn)生·OH的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了驗(yàn)證,得到了基本一致的結(jié)果,但芳環(huán)羥基化熒光法的結(jié)果更穩(wěn)定,靈敏度更高,故此方法對于·OH檢測以及抗·OH機(jī)理和應(yīng)用研究等方面具有較高應(yīng)用價(jià)值。 基于Mn~(2+)和Mn~(3+)是抑制還是促進(jìn)·OH產(chǎn)生的爭論,利用電子自旋共振法、芳環(huán)羥基化法和電泳法研究了Mn~(2+)和Mn~(3+)參與類Fenton反應(yīng)的情況。結(jié)果表明Mn~(2+)和Mn~(3+)在離子濃度較高時(shí)抑制·OH的產(chǎn)生,而降低Mn~(2+)和Mn~(3+)的離子濃度,·OH的產(chǎn)生明顯受到促進(jìn),·OH清除劑能明顯抑制Mn~(2+)
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R341
【圖文】：

Mn+2的促進(jìn)·OH產(chǎn)生的能力將受到抑制，如圖n所示。從圖n可以看出，在相同的Mn+2濃度下，當(dāng)增加Phe、H20:和反應(yīng)緩沖液的濃度時(shí)，促進(jìn)作用變?yōu)橐种谱饔谩?.3.1.4MnZ氣HZo:體系對DNA的損傷同樣的結(jié)果在電泳法中也有所體現(xiàn)，如圖12所示。從圖中我們可以看出:DNA鏈的損傷程度與Mn+2濃度有關(guān)，Mn+2濃度為1400x1o一6mofL/時(shí)，DNA鏈的損傷情況最明顯，而當(dāng)MnZ+濃度為Z000xio一6mol凡時(shí)，DNA鏈的損傷情況與不加MnZ+時(shí)基本相同。

9hjk0PV丫V圖15RZ+濃度為一5、10一喻。呱，Mn+2濃度對混合體系DNA鏈的降解的影響a.puelsn隊(duì)+HZoZ;b.puelsDNA+HZoZ+RZ+;e一u+erZ++MnZ+，MnZ+濃度分別為isxio一6mo呱、17x一0一6mo比、19xio一‘場oL/l、Puel8DNA+H20220xl0一01L/八22x10一mo比、25xl-o6mo比、IO0x10一。比、140xio一6mo呱、29xl0一6mo呱、180x10一6moL/l、33xz0一6mo比、220x10一。比、soxlo一nlo比、印xlo一6mo呱、260xl0·喻。呱、34oxlo一喻01幾、3soxio一6mol幾、3sooxlo一mo呱;v:puelsDN^+H::02+MnZ+300x10一01幾、，M+nz濃度為15xlrmol幾;w:makeL.23.3Mn+3一HZO:體系產(chǎn)生.OH的情況23入1M+ns濃度對反應(yīng)的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示Mn3+是否促進(jìn)·oH的產(chǎn)生受其濃度的影響，總的來說在較高的濃度下Mn+3將會(huì)抑制.oH的產(chǎn)生，而在較低的濃度下促進(jìn).oH的產(chǎn)生，如圖16所示。圖16顯示用HPLc一芳環(huán)輕基化法測得的在不同的Mn+3濃度下體系中相對熒光強(qiáng)度的情況，結(jié)果表明:當(dāng)Mn+3濃度在。一15x10一6m0比之間時(shí)

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本文編號(hào)：2750713