【摘要】：乳酸脫氫酶C4(LDH-C4)是一種睪丸特異的乳酸脫氫酶同工酶，它在精子發(fā)生的過程中及精子成熟后始終有部分位于精子的漿膜上，并利用精漿中的乳酸產(chǎn)生能量作為精子的動(dòng)力。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，針對(duì)LDH-C4的抗體具有避孕效果，因此，近20年來，LDH-C4一直是避孕疫苗研究開發(fā)的重要候選對(duì)象之一。 我們將小鼠LDH-C亞基全長(zhǎng)編碼序列克隆入質(zhì)粒pET-28a，構(gòu)建原核重組表達(dá)載體。轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(ED3)，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后，通過SDS-PAGE、乳酸脫氫酶活性測(cè)定、乳酸脫氫酶同工酶酶譜分析對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行了鑒定。結(jié)果顯示我們獲得了大量具有生物活性的可溶性小鼠重組LDH-C4，為下一步大量純化小鼠LDH-C4和動(dòng)物免疫實(shí)驗(yàn)提供了條件。 我們同時(shí)采用帶強(qiáng)力CMV啟動(dòng)子的pVAX1質(zhì)粒構(gòu)建了小鼠LDH-C4的真核重組表達(dá)載體，并轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞，進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá)。通過RT-PCR在mRNA水平上鑒定到外源性LDH-C基因的轉(zhuǎn)錄，通過提取轉(zhuǎn)染細(xì)胞總蛋白進(jìn)行乳酸脫氫酶活性測(cè)定、乳酸脫氫酶同工酶酶譜分析，鑒定到目的蛋白的表達(dá)。這是首次在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)了小鼠LDH-C4蛋白，為進(jìn)行避孕基因疫苗的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R392
【圖文】：

第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文5.乳酸脫氫酶同工酶的聚丙烯酞胺凝膠電泳從圖6可以看出，將重組菌裂解后上清中存在的可溶性蛋白LDH一C4，在LDH一3和LDH一4之間有特異性顯色，而各組對(duì)照組中均沒有。圖6乳酸脫氫酶同工酶的聚丙烯酞胺凝膠電泳Figure6.PAGEanalysisoflaetatede勿drogenaseisozymes1空質(zhì)粒誘導(dǎo)前;2空質(zhì)粒誘導(dǎo)后;3重組質(zhì)粒誘導(dǎo)前;4重組質(zhì)粒誘導(dǎo)后;5新鮮人血清:pET一28(a):pET

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前9條

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本文編號(hào)：2750438