【摘要】：乳酸脫氫酶C4(LDH-C4)是一種睪丸特異的乳酸脫氫酶同工酶，它在精子發(fā)生的過程中及精子成熟后始終有部分位于精子的漿膜上，并利用精漿中的乳酸產(chǎn)生能量作為精子的動力。動物實(shí)驗(yàn)證明，針對LDH-C4的抗體具有避孕效果，因此，近20年來，LDH-C4一直是避孕疫苗研究開發(fā)的重要候選對象之一。 我們將小鼠LDH-C亞基全長編碼序列克隆入質(zhì)粒pET-28a，構(gòu)建原核重組表達(dá)載體。轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(ED3)，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后，通過SDS-PAGE、乳酸脫氫酶活性測定、乳酸脫氫酶同工酶酶譜分析對表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行了鑒定。結(jié)果顯示我們獲得了大量具有生物活性的可溶性小鼠重組LDH-C4，為下一步大量純化小鼠LDH-C4和動物免疫實(shí)驗(yàn)提供了條件。 我們同時(shí)采用帶強(qiáng)力CMV啟動子的pVAX1質(zhì)粒構(gòu)建了小鼠LDH-C4的真核重組表達(dá)載體，并轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞，進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá)。通過RT-PCR在mRNA水平上鑒定到外源性LDH-C基因的轉(zhuǎn)錄，通過提取轉(zhuǎn)染細(xì)胞總蛋白進(jìn)行乳酸脫氫酶活性測定、乳酸脫氫酶同工酶酶譜分析，鑒定到目的蛋白的表達(dá)。這是首次在哺乳動物細(xì)胞中表達(dá)了小鼠LDH-C4蛋白，為進(jìn)行避孕基因疫苗的動物實(shí)驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R392
【圖文】：

第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文5.乳酸脫氫酶同工酶的聚丙烯酞胺凝膠電泳從圖6可以看出，將重組菌裂解后上清中存在的可溶性蛋白LDH一C4，在LDH一3和LDH一4之間有特異性顯色，而各組對照組中均沒有。圖6乳酸脫氫酶同工酶的聚丙烯酞胺凝膠電泳Figure6.PAGEanalysisoflaetatede勿drogenaseisozymes1空質(zhì)粒誘導(dǎo)前;2空質(zhì)粒誘導(dǎo)后;3重組質(zhì)粒誘導(dǎo)前;4重組質(zhì)粒誘導(dǎo)后;5新鮮人血清:pET一28(a):pET

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前9條

1 常建軍,彭景ii;精子特異性乳酸脫氫酶的免疫學(xué)特性及其應(yīng)用[J];動物學(xué)雜志;2002年02期

2 孫樹漢;影響核酸疫苗應(yīng)用研究的若干問題[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2002年04期

3 鄧順美,李叔庚,文建國,王鐵霞,高建華;不育癥精子乳酸脫氫酶同功酶LDHx活性測定及其定位研究[J];中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志;2001年01期

4 宋濟(jì)范;精子避孕疫苗抗原研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué).免疫學(xué)分冊;1995年03期

5 劉紅軍,潘善培,謝琪璇,肖鑾娟,董魯;卵透明帶DNA避孕疫苗pVAX1-pZP3α的構(gòu)建及其在體外的表達(dá)[J];暨南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版);2003年01期

6 譚委民,丘志昌,苗秉(钅監(jiān));人體精液中乳酸脫氫酶同工酶的相對活力測定及其應(yīng)用[J];臨床檢驗(yàn)雜志;1985年02期

7 黃宇烽,王一飛,趙金然,呂年青;以免疫球蛋白為基礎(chǔ)的避孕藥具研究/設(shè)想[J];中華男科學(xué);2000年01期

8 吳玉水,任君萍,張偉,丁天兵,黃慶生,宋建華,張紅毅,朱忠勇,馬文煜;乙型腦炎病毒E蛋白基因的克隆及其在大腸埃希菌中的表達(dá)[J];中華傳染病雜志;2004年02期

9 司進(jìn),朱蔭昌,余傳信,王春新;一種簡便的重組克隆篩選方法——克隆聚合酶鏈反應(yīng)法[J];中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2000年04期

本文編號：2750438