發(fā)布時(shí)間：2020-07-10 05:22

【摘要】： 選擇雞作為免疫對(duì)象是因?yàn)槠渚哂锌乖鑴┝啃�，無(wú)需抽血就可以獲得大量從血清轉(zhuǎn)運(yùn)至蛋黃中的抗體。此蛋黃中的抗體稱(chēng)為IgY(Yolk Immunoglobulin)。 首先將T_4甲酯化再與牛血清白蛋白(BSA)偶聯(lián)為全抗原，分別對(duì)A、B兩只雞進(jìn)行免疫。A雞首次免疫20μg。20天后實(shí)施加強(qiáng)免疫50μg。首次免疫后第62天實(shí)施第三次免疫100μg。首次免疫后第36天在血清中檢測(cè)到抗體，蛋黃中則晚8天檢測(cè)到抗體。B雞首次免疫100μg，45天后實(shí)施第二次免疫。首次免疫后第35天在血清中檢測(cè)到抗體，蛋黃中則晚6天檢測(cè)到。在首次免疫后的兩個(gè)月內(nèi)兩只雞血清中抗體含量始終高于蛋黃，隨著以后加強(qiáng)免疫，蛋黃中抗體含量增加并逐漸追上血清中抗體含量后超出，但兩者間差距始終不很明顯�？傮w看來(lái)A雞抗體含量增高的趨勢(shì)優(yōu)于B雞。本文觀(guān)察到首次免疫與后來(lái)加強(qiáng)免疫劑量(A雞全程免疫共用870μg抗原，B雞共用950μg)對(duì)抗體產(chǎn)生起到重要的作用。高效價(jià)抗體在雞最后一次免疫兩個(gè)月后才有下降的趨勢(shì)。 蛋黃經(jīng)去離子水1：2稀釋后加等倍正丁醇去脂為宜；蛋黃1：2水稀釋后，pH在5.0-10.0時(shí)蛋黃去脂上清IgY沒(méi)有丟失；正丁醇去脂不同操作流程(4℃靜置30min、室溫靜置30min、搖動(dòng)后立即4℃3000xg離心15min)對(duì)IgY的含量和結(jié)合抗原的活性沒(méi)有影響；正丁醇對(duì)IgY的活性無(wú)影響。另外正丁醇比水稀釋法去除雜蛋白效果好。蛋黃正丁醇去脂后應(yīng)用飽和硫酸銨和飽和硫酸鈉兩種不同鹽析法純化IgY進(jìn)行比較，飽和硫酸銨略好于飽和硫酸鈉鹽析法，其純化后所獲得的產(chǎn)量達(dá)9.5mg IgY/ml卵黃， 天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 純度94．l％。經(jīng)SDSPAGE分析，鹽析法純化IgY蛋白帶清晰�？傊� 醇去脂是一種快速、簡(jiǎn)便、有效的純化IgY的方法。 本文應(yīng)用蛋黃正丁醇去脂獲得的抗T4－IgY建立了放免檢測(cè)方法，對(duì)抗－ T4 IgY的質(zhì)量進(jìn)行鑒定：抗體滴度為 1：2500，工作濃度在 1：2500至 1：5000范圍內(nèi)；與 T3的交叉反應(yīng)為 1．28％；親和常數(shù)為 2．13 X 109L／m＊。 這些合乎放免測(cè)定所需要的要求。方法學(xué)考核數(shù)據(jù)如下：最小檢出量為 1石7ng／ml；批內(nèi)平均變異系數(shù)為 5．3％，批間平均變異系數(shù)為 7．0％；平均回 收率為96．13％。用本法與臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用的IgG－RIA法同時(shí)測(cè)定20例標(biāo) 本后進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)，兩種方法測(cè)定結(jié)果差別無(wú)顯著性，呈顯著正相關(guān) （po．9988）。本文制備的IgY用于放免測(cè)定臨床標(biāo)本能很好地區(qū)分甲亢、 甲低和正常人群。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類(lèi)號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 王炯,龔春梅,趙樹(shù)棟,宋霞;雞卵抗體(IgY)理化特性的研究[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;1997年03期

2 龍中兒,鐘青萍,朱躍科,熊勇華,楊榮鑒,楊寧生,劉活林,謝建樂(lè);卵黃免疫球蛋白的穩(wěn)定性研究[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;1997年04期

3 鄭紅,趙學(xué)勤,喬玲,張鏡宇;甲狀腺素抗體制備的改進(jìn)[J];天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1998年02期

本文編號(hào)：2748498