發(fā)布時間：2020-07-09 21:33

【摘要】： 人β-NGF基因在大腸桿菌與倉鼠卵巢細胞中的表達 神經(jīng)生長因子(Nerve growth factor, NGF)是最重要的神經(jīng)營養(yǎng)因子之一，在神經(jīng)、免疫、造血、生殖及內(nèi)分泌等系統(tǒng)均有重要生物學(xué)作用，尤其在神經(jīng)系統(tǒng)中的作用已被公認。NGF對調(diào)節(jié)神經(jīng)元的生長、發(fā)育、分化、存活及神經(jīng)損傷的再生修復(fù)均具有重要作用，在Alzheimer’s病、脊髓損傷和外周神經(jīng)病變等疑難性神經(jīng)系統(tǒng)疾病中已證實有較好治療效果。天然NGF可從表達豐富的人組織中直接提取，但操作中存在諸多問題，遠不能滿足臨床用藥的需要，且因為NGF是大分子蛋白，不易透過血腦屏障，故治療受到限制。NGF分子的β鏈是具有NGF活性的小分子片段，能穿過血腦屏障。為了能尋求一種切實可行及表達高活性小分子NGF的生產(chǎn)途徑，我們通過基因工程和細胞工程技術(shù)設(shè)計了兩種NGF的體外重組方案。 第一部分 人β-NGF基因與原核表達載體PBV220-β-NGF的構(gòu)建及其在大腸桿菌中的表達 目的 為β-NGF的基因制藥選擇一種新方法。方法 設(shè)計一對特異引物，直接從人血細胞基因組DNA中PCR擴增出NGF基因片段，先克隆至PUC-T載體中，經(jīng)過酶切獲得NGF片段后再定向插入原核表達載體PBV220，將構(gòu)建的重組體PBV220-β-NGF轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α，并將篩選的陽性克隆通過42℃誘導(dǎo)表達。結(jié)果 人日一NGF基因在大腸桿菌與倉鼠卵果細胞中的表達中文摘要 經(jīng)限制酶酶切電泳和DNA測序證實，確為p一GF全長序列(約 380bp);全菌經(jīng)SDS一隊GE電泳和薄層掃描顯示，p一NGF蛋白量占 菌體總蛋白量20.7%。結(jié)論成功克隆p~NGF基因全長序列并在大 腸桿菌中獲穩(wěn)定表達，其生物學(xué)活性有待于進一步研究。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號】：R346
【圖文】：

3438ObP一圖1一4PBV220一旦一NGFPCR產(chǎn)物電泳圖Fig.1一4AgaroseFromgeleleetroPhoresisofPCRProduetsPlasmidPBV220一旦一NGFLanel:GeneRulerTMIO0bpDNAladder(11laddersfromuptodownare1000，900，800，700，600，500，400，300

380bP一圖1一3重組構(gòu)建體PBV220一p一NGF雙酶切電泳圖Fig.1一3IdentifieationofPBV220一p一NGFbyenZymedigestionLanel.DNAmarker(fromuPtodown:21227/5148or4973/4269/3530/2027門904八587/1375/941/831/564八25)Lane2.PBV22O一旦一NGFBamHI+XbalLane3.UndigestedPBV22O一p一NGFPlasmid.3438ObP一圖1一4PBV220一旦一NGFPCR產(chǎn)物電泳圖Fig.1一4AgaroseFromgeleleetroPhoresisofPCRProduetsPlasmidPBV220一旦一NGFLanel:GeneRulerTMIO0bpDNAladder(11laddersfromuptodownare1000，900，800，700，600，500，400，300

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【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 阮奕文,王傳恩,劉述,姚志彬;NGF/GDNF基因修飾神經(jīng)干細胞植入AD模型鼠腦內(nèi)的存活、分化及表達[J];解剖學(xué)報;2001年04期

2 隋廣超，胡美浩;影響大腸桿菌中外源基因表達的因素[J];生物化學(xué)與生物物理進展;1994年02期

3 韓曉楓,張瀾生,朱壽彭;人β-NGF基因的體外擴增、克隆及其序列的分析[J];蘇州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1999年12期

4 韓曉楓,張瀾生,繆競誠,周■,朱壽彭;人β-NGF基因在COS-7細胞中的表達及其生物學(xué)活性的研究[J];細胞與分子免疫學(xué)雜志;2001年04期

本文編號：2748010