發(fā)布時(shí)間：2020-07-09 13:26

【摘要】： 人胸腺素α原（Human prothymosinα，ProTα）是一個(gè)在體內(nèi)分布廣 泛，進(jìn)化上高度保守的強(qiáng)酸性蛋白質(zhì)，其相對(duì)分子量為1.3×10~4，基因定 位于第2號(hào)染色體上，目前已有6個(gè)亞家族成員被克隆和測(cè)序。ProTα作 為免疫調(diào)節(jié)因子具有多種生理功能，國外克隆出高加索人種的ProTα基因， 其表達(dá)產(chǎn)物作為抗腫瘤的一種生物制品已進(jìn)入了臨床驗(yàn)證階段。 我們從中國人本身克隆出漢族人的ProTα基因，已被美國NCBI GenBank收錄（Accession:AF170294）。新基因長度為300bp，編碼100個(gè)氨 基酸，在DNA水平與高加索人的有90％的同源性，推導(dǎo)的氨基酸序列與 國外已克隆的ProTα有86.4％同源性，說明這是一個(gè)ProTα的新亞型。我 們?cè)谠讼到y(tǒng)中成功表達(dá)新ProTα基因的融合蛋白，分子量為3.7×10~4。 經(jīng)純化鑒定后，對(duì)它的生物學(xué)功能作了進(jìn)一步研究。 以經(jīng)原核系統(tǒng)表達(dá)并純化的GST蛋白作對(duì)照品，發(fā)現(xiàn)本室融合表達(dá)的 ProTα蛋白可明顯刺激人外周血淋巴細(xì)胞E—玫瑰花結(jié)形成率，最高濃度 的ProTα（10~(-7)mol/L）的刺激率可達(dá)52.7％。 ProTα有顯著的促細(xì)胞增殖作用。在無ConA作用下，單獨(dú)ProTα以 10~(-7)、10~(-8)mol/L濃度明顯刺激小鼠胸腺和脾細(xì)胞增殖（p＜0.01）；在與ConA 協(xié)同作用下，10~(-7)mol/L濃度的ProTα能明顯促進(jìn)胸腺細(xì)胞的增殖（p＜0.01）， 大于10~(-10)mol/L濃度的ProTα都能明顯促進(jìn)脾細(xì)胞的增殖（p＜0.01）。不論 有無ConA，ProTα對(duì)兩種細(xì)胞的促增殖作用有劑量依賴性。 在ProTα影響細(xì)胞因子分泌的實(shí)驗(yàn)研究中，發(fā)現(xiàn)ProTα在一定劑量上 可顯著促進(jìn)具有免疫調(diào)節(jié)活性的細(xì)胞因子IL-2和IFN-γ、炎癥介導(dǎo)活性的 TNF-α、抗病毒活性的IFN-α的分泌。無論有無ConA，10~(-7)、10~(-8)mol/L濃 度的ProTα均能促進(jìn)小鼠胸腺和脾細(xì)胞分泌IL-2；10~(-7)mol/L濃度的ProTα 能促進(jìn)IFN-γ的分泌；ProTα和ConA（5μg/ml）有協(xié)同作用，且均以10~(-7)mol/L 濃度最佳。在LPS（10μg/ml）的誘導(dǎo)下，與對(duì)照組相比，10~(-7)mol/L ProTα能 有效地刺激小鼠巨噬細(xì)胞分泌TNF-α（p＜0.01）和IFN-α（p＜0.01）。 為了考察在mRNA水平上ProTα對(duì)小鼠脾細(xì)胞的影響，我們應(yīng)用MGEC 胸腺素口原的生物學(xué)活性及DNA芯片分析研究 一405基因表達(dá)譜芯片進(jìn)行了研究比較，發(fā)現(xiàn) ProT a對(duì)七種基因有上調(diào)作 用：蛋白酪氨酸磷酸酶基因p＊＊朋幻＊e＊BmMD：＊24700卜 淋巴細(xì)胞抗原 6復(fù)合體（D86232X 增殖相關(guān)基因A（D21252卜 多功能蛋白水解酶7的大亞 基（X64449卜 核糖體蛋白L6（NMOI 1290廠 鼠6 號(hào)染色體BAC一 284H12（AC002397）、鼠E7．5胚胎文庫肌蛋白CDNA（AW536575），等等。這 些基因在與兩種探針雜交時(shí)表現(xiàn)出較大的差異，且上下調(diào)趨勢(shì)一致，程度 相似。 結(jié)果表明，新基因具有顯著的免疫調(diào)節(jié)生物學(xué)功能，對(duì)許多疾病的治 療有潛在意義，這為我們下一步研究提供了理論基礎(chǔ)。相信經(jīng)過我們的努 力，新的 ProT a蛋白可作為一種新的基因工程藥物應(yīng)用于臨床。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2001
【分類號(hào)】：Q574;Q78

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 郭葆玉,余建國,張淑英,道書艷,苗紅,邱磊;克隆人胸腺素α原cDNA及RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)分析和帶Xa因子的融合表達(dá)[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2000年01期

2 道書艷,卞廣興,苗紅,邱磊,郭葆玉,余建國,張淑英;一種新的胸腺素α原cDNA[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2000年02期

3 張符光，劉佃辛;胸腺和胸腺素研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊(cè));1996年04期

4 張符光，劉佃辛，宋農(nóng)，王新為，張兆山，馬清鈞;人胸腺素α原cDNA的克隆及在大腸桿菌中的表達(dá)[J];生物化學(xué)雜志;1996年04期

5 鄭金來,劉佃辛,李君文,高蘭興,張符光,王新為,李國亮,吳小楓;胸腺素α原對(duì)老齡鼠T細(xì)胞和幾種細(xì)胞因子分泌的影響[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展;1999年02期

6 劉佃辛,王先遠(yuǎn),張符光,顧景范;重組人胸腺素α原體外活性觀察[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展;1999年02期

本文編號(hào)：2747520