本文關(guān)鍵詞：BMSCs在PVDF-g-PNIPAAm溫敏膜上的培養(yǎng)與收獲，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目前,間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal Stem Cells, MSCs)收獲主要采用胰酶消化法,即通過破壞細(xì)胞與基底材料之間以及細(xì)胞與細(xì)胞之間的連接使細(xì)胞得以解離和分散,在一定程度上造成了細(xì)胞外基質(zhì)損傷,因此影響了MSCs在組織工程和醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用。聚N-異丙基丙烯酰胺((Poly(N-isopropylacrylamide), PNIPAAm)聚合物溫敏表面可以實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的粘附生長和降溫脫附,為實(shí)現(xiàn)MSC的溫和收獲提供了一條有效的解決途徑。本文采用堿處理法和自由基聚合法合成了三組不同接枝率(2.75%,6.25%和12.20%) 的 PVDF(Polyvinylidene fluoride)-g-PNIPAAm共聚物,傅立葉變換紅外光譜(Fourier Transform Infrared Spectroscopy, FTIR)和氫譜核磁共振波譜(1H-Nulcear Magnetic Resonance,1H-NMR)分析表明,PNIPAAm已成功接枝PVDF上。利用浸沒沉淀相轉(zhuǎn)化法分別制備了三組聚合物相對(duì)應(yīng)的PVDF-g-PNIPAAm薄膜,分別記為M20,M40和M60。掃描電子顯微鏡觀察和靜態(tài)接觸角測量分析表明,PVDF-g-PNIPAAm膜表面具有微狀結(jié)構(gòu),呈現(xiàn)出親水性和溫敏性。其次,我們利用全骨髓貼壁培養(yǎng)法分離純化了大鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells, BMSCs),并且從形態(tài)學(xué)、細(xì)胞表面抗原、增殖能力及多向分化潛能方面進(jìn)行了鑒定。結(jié)果表明,BMSCs呈現(xiàn)出類成纖維樣細(xì)胞的梭形形態(tài)；第4代的BMSCs表面抗原CD34、CD29、CD90的表達(dá)率分別為2.1%、94.0%、92.6%,具有MSC表面抗原的表達(dá)特性；以5OOcells/cm2的密度接種于6孔板培養(yǎng)2周的克隆形成率為1.73%,符合干細(xì)胞增殖能力強(qiáng)的特性；經(jīng)定向誘導(dǎo)培養(yǎng)后,BMSCs可以分化為脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞。MTT實(shí)驗(yàn)和降溫脫附實(shí)驗(yàn)表明,BMSCs可以在溫敏膜上粘附生長,但細(xì)胞活性低于細(xì)胞培養(yǎng)板上的細(xì)胞活性,降溫脫附的效率可達(dá)75%以上。誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)表明,M60溫敏膜脫附收獲的BMSCs仍保持了原有的脂肪分化和成骨分化能力。
【關(guān)鍵詞】：PVDF-g-PNIPAAm 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 培養(yǎng) 脫附
【學(xué)位授予單位】：大連理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-6
• 目錄6-9
• 引言9-10
• 1 文獻(xiàn)綜述10-22
• 1.1 溫敏型材料聚-N異丙基丙稀酰胺10-11
• 1.1.1 聚-N異丙基丙烯酰胺概述10
• 1.1.2 聚N-異丙基丙烯酰胺的溫敏機(jī)制10-11
• 1.2 PNIPAAm溫敏型材料在細(xì)胞培養(yǎng)收獲方面的應(yīng)用11-18
• 1.2.1 PNIPAAm溫敏型材料應(yīng)用于細(xì)胞培養(yǎng)收獲的原理和優(yōu)勢11-14
• 1.2.2 PNIPAAm溫敏型材料應(yīng)用于細(xì)胞收獲的研究進(jìn)展14-17
• 1.2.3 PNIPAAm溫敏型材料在干細(xì)胞培養(yǎng)與收獲方面的應(yīng)用17-18
• 1.3 聚偏氟乙烯及其溫敏改性方法18-20
• 1.3.1 聚偏氟乙烯的概述18-19
• 1.3.2 聚偏氟乙烯的溫敏改性19-20
• 1.4 本文的選題依據(jù)和研究內(nèi)容20-22
• 2 PVDF-g-PNIPAAm共聚物的合成及表征22-28
• 2.1 引言22
• 2.2 儀器設(shè)備和藥品試劑22-23
• 2.2.1 儀器設(shè)備23
• 2.2.2 藥品試劑23
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法23-24
• 2.3.1 PVDF-g-PNIPAAm共聚物的合成23-24
• 2.3.2 PVDF-g-PNIPAAm共聚物的表征24
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論24-27
• 2.4.1 核磁共振氫譜25-26
• 2.4.2 傅里葉變換紅外光譜26-27
• 2.5 小結(jié)27-28
• 3 PVDF-g-PNIPAAm溫敏膜的制備及表征28-33
• 3.1 引言28-29
• 3.2 儀器設(shè)備和藥品試劑29
• 3.2.1 儀器設(shè)備29
• 3.2.2 藥品與試劑29
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法29-30
• 3.3.1 PVDF-g-PNIPAAm薄膜的制備29-30
• 3.3.2 PVDF-g-PNIPAAm薄膜的表征30
• 3.3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析30
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論30-32
• 3.4.1 膜表面的掃描電鏡圖30-31
• 3.4.2 膜表面接觸角測定31-32
• 3.5 小結(jié)32-33
• 4 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定33-46
• 4.1 引言33
• 4.2 實(shí)驗(yàn)儀器器材和藥品試劑33-35
• 4.2.1 主要的儀器設(shè)備33-34
• 4.2.2 主要的藥品試劑和實(shí)驗(yàn)器材34
• 4.2.3 實(shí)驗(yàn)溶液及試劑的配制34-35
• 4.2.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物35
• 4.3 實(shí)驗(yàn)方法35-39
• 4.3.1 BMSCs的分離與原代培養(yǎng)35-36
• 4.3.2 BMSCs的傳代培養(yǎng)36
• 4.3.3 BMSCs生長曲線的繪制36
• 4.3.4 細(xì)胞表面抗原檢測36-37
• 4.3.5 細(xì)胞的增殖能力37
• 4.3.6 細(xì)胞的多向分化鑒定37-38
• 4.3.7 BMSCs的凍存與復(fù)蘇38-39
• 4.3.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析39
• 4.4 結(jié)果與討論39-45
• 4.4.1 BMSCs的分離培養(yǎng)39-41
• 4.4.2 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面抗原標(biāo)記41-42
• 4.4.3 細(xì)胞的增殖能力42-43
• 4.4.4 BMSCs的多向分化能力43-45
• 4.5 小結(jié)45-46
• 5 BMSCs在溫敏膜上的培養(yǎng)、脫附和鑒定46-56
• 5.1 引言46
• 5.2 儀器設(shè)備和藥品試劑46
• 5.3 實(shí)驗(yàn)方法46-49
• 5.3.1 BMSCs在PVDF-g-PNIPAAm溫敏膜表面的粘附46
• 5.3.2 BMSCs在PVDF-g-PNIPAAm溫敏膜表面的生長活性46-47
• 5.3.3 BMSCs在PVDF-g-PNIPAAm溫敏膜表面的降溫脫附47
• 5.3.4 細(xì)胞在PVDF-g-PNIPAAm溫敏膜上的成脂和成骨分化47-48
• 5.3.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析48-49
• 5.4 結(jié)果與討論49-54
• 5.4.1 BMSCs在PVDF-g-PNIPAAm溫敏膜上的形態(tài)學(xué)觀察49
• 5.4.2 BMSCs在PVDF-g-PNIPAAm溫敏膜表面的生長活性49-51
• 5.4.3 BMSCs在PVDF-g-PNIPAAm溫敏膜表面的脫附51
• 5.4.4 BMSCs在PVDF-g-PNIPAAm溫敏膜表面培養(yǎng)后的成脂和成骨分化51-54
• 5.5 小結(jié)54-56
• 結(jié)論56-57
• 創(chuàng)新點(diǎn)及展望57-58
• 參考文獻(xiàn)58-64
• 附錄A 英文縮略圖64-66
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況66-67
• 致謝67-68

【參考文獻(xiàn)】

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中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王聞?dòng)?聚偏氟乙烯智能膜的制備及其性能研究[D];天津工業(yè)大學(xué);2006年

  本文關(guān)鍵詞：BMSCs在PVDF-g-PNIPAAm溫敏膜上的培養(yǎng)與收獲，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：274717