【摘要】： 目的 (1)觀察腸道缺血再灌注(GIR)損傷對中性粒細胞(PMNs)功能和凋亡影響，GIR損傷后血漿脂質過氧化物(LPO)、乳酸和PMNs在腸組織中扣押的變化；(2)觀察重組人生長激素(rhGH)對GIR損傷大鼠PMN功能和凋亡的影響及其凋亡相關基因的表達與調控；(3)rhGH在GIR損傷后炎性損害中的調理作用。 方法 60只大鼠隨機分為假手術對照組(Sham組)、腸缺血再灌注組(GIR組)、rhGH治療組(rhGH組)，其中rhGH組按不同用藥時間又分為再灌注后3小時用藥組(POR 3h組)和再灌注后12小時用藥組(POR 12h組)。利用經典的腸系膜前(上)動脈夾閉技術，復制大鼠全腸道缺血再灌注損傷模型，缺血時間為60min。GIR組和rhGH組分別在再灌注后24h、48h、72h取血，分離出PMNs和血漿，按樣本要求進行規(guī)范處理和保存。采用電鏡、免疫組化等先進技術，分別觀察血液PMN的凋亡、Fas凋亡基因的表達、呼吸爆發(fā)(NADPH氧化酶活性)和吞噬功能，并檢測血漿中LPO和乳酸含量及腸道組織中MPO活性。 結果 一、電鏡和光鏡觀察：GIR組PMN體積變小，細胞質濃縮，細胞核變小，染色質濃縮并凝結成塊，出現凋亡小體，呈典型的凋亡細胞表現。光鏡觀察結果和電鏡一致。 二、細胞凋亡的原位檢測：GIR損傷大鼠血液PMN凋亡率較Sham組顯著增加(P均＜0.01)，再灌注后72h凋亡率最高。rhGH治療可明顯降低 第一軍醫(yī)大學 中文摘要 GIR損傷大鼠血液PMN凋亡率，至再灌注后48h、72h出現顯著統(tǒng)計學差 別滬值分別0.05、0.01)，但仍明顯高于Sham組(P均0.01)。兩用藥組比 較，POR 3h組PMN凋亡率下降較POR 1 Zh組似乎更明顯，但無顯著統(tǒng)計 學差別(P均0.05)。PMN的凋亡率與Fas基因表達、血漿LPO含量、呼 吸爆發(fā)功能密切相關(;=0.9170，P0.001;:=0.5380，P0.001;;=0.3110， P0 .05)。 三、FaS的免疫組化染色:GIR損傷大鼠血液中FaS陽性表達的PMNS(%) 較Sham組顯著增加(P均0.01)，再灌注后48h Fas陽性表達的PMNs最多。 rhGH治療可明顯減少G工損傷大鼠血液中Fas陽性表達的PMNs，至再灌 注后48h、72h出現顯著統(tǒng)計學差別(P值分別0D5、0.01)，但仍顯著高于 Sham組(P均0.01)。兩用藥組比較，POR 3h組Fas陽性表達的PMNs減 少較POR 12h組似乎更明顯，但無顯著統(tǒng)計學差別(P均0 .05)。Fas陽性 表達的PMNs與血漿LPO含量密切相關(r一0.5470，尸0.001)。 四、呼吸爆發(fā)檢測:GIR損傷大鼠血液PMN的NADPH酶活性(吸光 度差值)較Sham組顯著增加(P均0，01)，再灌注后24h NADPH酶活性最 高。:hGH治療可明顯降低GIR損傷大鼠血液中PMN的NADPH酶活性， 除外POR12h組24h，其余各時相點均有顯著差異(P0.05或尸0.01)，但 rhGH組24h和POR 1 Zh組48h較Sham組仍有顯著差異(P均0.01)。兩用 藥組比較，POR3h組PMN的NADPH酶活性降低較為顯著，再灌注后24h 和48h有顯著差異(尸0.05)。PMN的呼吸爆發(fā)和吞噬率、吞噬指數密切相 關(r=0 .6 120，P0.001;r=0.5880，P0.001)。 丘、吞噬率和吞噬指數:GIR損傷大鼠血液PMN的吞噬率較Sham組 增力11，再灌注后24h，48h有顯著差異(P均0.01)。;hGH治療可明顯降低 GIR損傷大鼠血液PMN的吞噬率，除外POR 1 Zh組24h和rhGH用藥72h， 其余各時相點均有顯著差異(P0.05或尸0.01)，但rhGH組24h較sham 組仍有顯著差異滬均0.01)。兩用藥組比較，POR3h組pMN的吞噬率下 降較POR 12h組似乎更明顯，但無顯著統(tǒng)計學差別護均0 .05)。GIR損傷 大鼠血液PMN的吞噬指數較Shaln組增加，再灌注后24h， 48h有顯著差 異(P均0.01)。rhGH治療可明顯降低G破損傷大鼠血液PMN的吞噬指數， 一2— 第一軍醫(yī)大學 中文摘要 除外thGH用藥72h，其余各時相點均有顯著差異(P0.05或p0.01)，但 由GH組24h較sham組仍有顯著差異(P均0 .01)。兩用藥組間比較，POR 3h組PMN的吞噬指數下降較POR 12h組似乎更明顯，但無顯著統(tǒng)計學差 別(P均0 .05)。 六、血漿脂質過氧化物(LPO)含量檢測:GD又損傷大鼠血漿LPO含量 較Sham組顯著增加(P均0 .01)，再灌注后48h LPo含量最高。rhGH治療 可明顯降低G刃R損傷大鼠血漿LPO含量，除外POR 12h組24h，其余各 時相點均有顯著差異(P0.05)，但thGH組48h和72h較Sham組仍有顯著 差異(p0.0一或p0.05)。兩用藥組比較，POR 3h組血漿LPO含量降低較 POR 12h組似乎更明顯，但無顯著統(tǒng)計學差別(P均0.05)。 七、血漿乳酸濃度檢測:GIR損傷大鼠血漿乳酸濃度較Sham組顯著 增加(P均0.01)，再灌注后48h乳酸濃度最高。thGH治療可明顯降低G工 損傷大鼠血漿乳酸濃度，除外POR 12h組24h，其余各時相點均有顯著差 異伊0.05或p0.01)，但PoR 12h組24h較shaln組仍有顯著差異(P0.05)。 兩用藥組比較，顯示POR3h組血漿乳酸濃度降低較POR 12h組似乎更明 顯，但無顯著統(tǒng)計學差別(P均0 .05)。 八、腸組織髓過氧化物酶(MPo)活性檢測:GIR損傷大鼠腸組織MPO 活性較Shaln組顯著增加(P均0 .01)，再灌注后72h MPO活性最高。rhGH 治療可降低GIR損傷大鼠腸組織MPO活性，但無顯著統(tǒng)計學差別(P均 0 .05)，各時相點與sharn組比較仍有
【學位授予單位】：中國人民解放軍第一軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2003
【分類號】：R363;R965

【參考文獻】

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本文編號：2740405