【摘要】： 目的:造血干細(xì)胞移植(hematopoietic stem cell transplantation, HSCT )是治療惡性血液病、放化療敏感的實(shí)體腫瘤以及急性放射病的重要手段。HSCT后造血重建緩慢,出現(xiàn)骨髓造血抑制期,白細(xì)胞、血小板少,感染和出血成為移植后的主要并發(fā)癥之一,也是移植相關(guān)死亡的主要原因。目前認(rèn)為HSCT后造血重建緩慢與基質(zhì)損傷、缺乏合適的促進(jìn)造血干/祖細(xì)胞增殖、分化的微環(huán)境有關(guān)。自G-CSF、GM-CSF應(yīng)用于臨床以來(lái),明顯地縮短了中性粒細(xì)胞缺乏時(shí)間,降低了感染的發(fā)生率。然而目前針對(duì)因血小板減少引起的急性出血,臨床上主要依賴輸注血小板懸液,但長(zhǎng)期輸注血小板有可能帶來(lái)許多嚴(yán)重副作用,存在價(jià)格昂貴、反復(fù)輸注產(chǎn)生血小板抗體導(dǎo)致無(wú)效性血小板輸注等諸多問(wèn)題。已證實(shí),TPO是調(diào)控血小板生成的首要、特異性因子。因此,本課題以微環(huán)境的主要成分——骨髓基質(zhì)細(xì)胞(BMSCs)為靶細(xì)胞,用脂質(zhì)體將含小鼠TPOcDNA編碼區(qū)的真核表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染BMSCs,通過(guò)觀察轉(zhuǎn)染TPO基因的BMSCs移植對(duì)放射損傷后小鼠在血小板恢復(fù)及造血重建方面的作用,探索基質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的造血生長(zhǎng)因子基因治療促進(jìn)造血功能重建的可行性。 方法:體外部分:參照Dexter法分離培養(yǎng)小鼠BMSCs,免疫細(xì)胞化學(xué)法及細(xì)胞化學(xué)染色法鑒定小鼠BMSCs,脂質(zhì)體介導(dǎo)含小鼠TPOcDNA編碼區(qū)的真核表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染BMSCs,RT-PCR、免疫細(xì)胞化學(xué)法及Western blot法檢測(cè)目的基因轉(zhuǎn)染BMSCs后TPO在mRNA和蛋白水平的表達(dá),以轉(zhuǎn)染空載體(pcDNA3.1)質(zhì)粒和未轉(zhuǎn)染的BMSCs作為對(duì)照。體內(nèi)部分:采用單次劑量6.5Gy的60Co-γ射線照射受體鼠,照射后動(dòng)物隨機(jī)分四組,單純骨髓細(xì)胞移植組(A組)、未轉(zhuǎn)染BMSCs+骨髓細(xì)胞移植組(B組)、轉(zhuǎn)染TPO基因的BMSCs+骨髓細(xì)胞移植組(C組)、轉(zhuǎn)染空載體的BMSCs+骨髓細(xì)胞移植組(D組),分別于照射后24小時(shí)內(nèi)給予骨髓細(xì)胞、BMSCs移植,在不同時(shí)相點(diǎn)進(jìn)行血細(xì)胞計(jì)數(shù),取股骨骨髓細(xì)胞行瑞氏染色,肝、脾組織行HE染色,進(jìn)行組織病理學(xué)檢測(cè)。 結(jié)果:實(shí)驗(yàn)主要結(jié)果如下: 1.小鼠BMSCs的培養(yǎng)及鑒定BMSCs形態(tài)呈異質(zhì)性,原代細(xì)胞呈集落生長(zhǎng),傳代后則均勻生長(zhǎng),免疫細(xì)胞化學(xué)法顯示小鼠抗小鼠波形蛋白陽(yáng)性,大鼠抗小鼠DC單
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R346
【圖文】：

251: DNA marker； 2: 未轉(zhuǎn)染組；3:空載體轉(zhuǎn)染組；4: TPO基因轉(zhuǎn)染組圖1-1 小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞TPOmRNA的表達(dá)表1-1 不同實(shí)驗(yàn)組小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞中TPOmRNA的表達(dá)(ˉx ± s n=8)組別 TPOmRNA（NII）未轉(zhuǎn)染組 0.172±0.007空載體轉(zhuǎn)染組 0.182±0.014TPO基因轉(zhuǎn)染組 0.622±0.011▲#與未轉(zhuǎn)染組相比：▲P<0.01；與空載體轉(zhuǎn)染組相比：#P<0

251: DNA marker； 2: 未轉(zhuǎn)染組；3:空載體轉(zhuǎn)染組；4: TPO基因轉(zhuǎn)染組圖1-1 小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞TPOmRNA的表達(dá)表1-1 不同實(shí)驗(yàn)組小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞中TPOmRNA的表達(dá)(ˉx ± s n=8)組別 TPOmRNA（NII）未轉(zhuǎn)染組 0.172±0.007空載體轉(zhuǎn)染組 0.182±0.014TPO基因轉(zhuǎn)染組 0.622±0.011▲#與未轉(zhuǎn)染組相比：▲P<0.01；與空載體轉(zhuǎn)染組相比：#P<0

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 史曦凱,王吉?jiǎng)?梁后杰,張翼軍,陳潔平,夏順中,羅高興;腺病毒介導(dǎo)CTLA4Ig基因修飾的骨髓基質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)特異性免疫耐受的實(shí)驗(yàn)研究[J];重慶醫(yī)學(xué);2002年09期

本文編號(hào)：2740059