【摘要】：念珠菌是人類最常見的機(jī)會(huì)致病菌，可引起從皮膚粘膜表淺感染到內(nèi)臟各系統(tǒng)感染的廣譜病變。由于在真菌的鑒定分類中傳統(tǒng)的表型生物學(xué)方法程序繁瑣，結(jié)果的重復(fù)性差，所以人們對此類菌的致病性及流行病學(xué)等了解甚少。DNA探針雜交技術(shù)提供了有效可靠的研究手段。本文從DNA的提取，染色體DNA酶切分析，核酸分子雜交以及光敏生物素標(biāo)記核酸探針與同位素探針的比較等方面對念珠菌進(jìn)行了研究。 首先采用蝸牛酶破壁獲得原生質(zhì)體，以SDS溶解細(xì)胞，經(jīng)酚、氯仿抽提純化，獲得染色體DNA。 第二，對6種常見致病性念珠菌標(biāo)準(zhǔn)株的DNA用EcoRI進(jìn)行限制性酶切，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳，可見各種念珠菌具有不同的帶型。其中白念株菌(白念)出現(xiàn)EB染色明顯的3條帶，其分子量為4.9、3.7、2.5kb。白念臨床分離株(6株)與標(biāo)準(zhǔn)株的酶切帶型一致。這些菌經(jīng)傳代培養(yǎng)后再做酶切，其帶壁不變。提示(1)這3條帶型為白念的基因特點(diǎn)；(2)此帶型具有很好的穩(wěn)定性和重復(fù)性，因而DNA的EcoRI酶切圖可作為白念菌種鑒定和流行病學(xué)調(diào)查的參考。 第三，通過白念DNA酶切圖的分析，回收了標(biāo)準(zhǔn)株CliDNA2.2～3kb范圍的片段。用~(32)P經(jīng)缺口轉(zhuǎn)移標(biāo)記后作為探針，分別與各種念珠菌、隱球菌和細(xì)菌做Southern和斑點(diǎn)印跡雜交。結(jié)果所有白念株與Cli2.5kb片段雜交陽性。5株近平滑念珠菌和1株熱帶念珠菌與2.2～3kb片段有微弱的雜交信號，其他菌均未出現(xiàn)雜交。表明白念CliDNA2.5kb片段可能含有白念種特異性堿基序列，經(jīng)進(jìn)一步克隆證實(shí)后可以作為白念菌種鑒定和種內(nèi)分型的有用探針。 第四，分別用6—氨基己酸光敏生物素和生物素交聯(lián)光敏補(bǔ)骨脂素標(biāo)記探針進(jìn)行雜交。經(jīng)A—AP系統(tǒng)顯色，6—氨基己酸光敏生物素標(biāo)記活性為1pg，標(biāo)記探針與靶DNA雜交可檢測至100pg以下，與全細(xì)胞DNA雜交，檢測敏感性在125pg。其檢測敏感性與同位素探針相同，較光敏補(bǔ)骨脂素高約10倍，另外，兩種光敏生物素標(biāo)記探
【學(xué)位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：1991
【分類號】：R346
【圖文】：

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【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 吳明;基因擴(kuò)增技術(shù)的一次重大改進(jìn)[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;1990年04期

2 何笑松;;生物素標(biāo)記核酸技術(shù)[J];生物工程學(xué)報(bào);1986年01期

本文編號：2737166