【摘要】：念珠菌是人類最常見的機會致病菌，可引起從皮膚粘膜表淺感染到內(nèi)臟各系統(tǒng)感染的廣譜病變。由于在真菌的鑒定分類中傳統(tǒng)的表型生物學方法程序繁瑣，結(jié)果的重復性差，所以人們對此類菌的致病性及流行病學等了解甚少。DNA探針雜交技術(shù)提供了有效可靠的研究手段。本文從DNA的提取，染色體DNA酶切分析，核酸分子雜交以及光敏生物素標記核酸探針與同位素探針的比較等方面對念珠菌進行了研究。 首先采用蝸牛酶破壁獲得原生質(zhì)體，以SDS溶解細胞，經(jīng)酚、氯仿抽提純化，獲得染色體DNA。 第二，對6種常見致病性念珠菌標準株的DNA用EcoRI進行限制性酶切，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳，可見各種念珠菌具有不同的帶型。其中白念株菌(白念)出現(xiàn)EB染色明顯的3條帶，其分子量為4.9、3.7、2.5kb。白念臨床分離株(6株)與標準株的酶切帶型一致。這些菌經(jīng)傳代培養(yǎng)后再做酶切，其帶壁不變。提示(1)這3條帶型為白念的基因特點；(2)此帶型具有很好的穩(wěn)定性和重復性，因而DNA的EcoRI酶切圖可作為白念菌種鑒定和流行病學調(diào)查的參考。 第三，通過白念DNA酶切圖的分析，回收了標準株CliDNA2.2～3kb范圍的片段。用~(32)P經(jīng)缺口轉(zhuǎn)移標記后作為探針，分別與各種念珠菌、隱球菌和細菌做Southern和斑點印跡雜交。結(jié)果所有白念株與Cli2.5kb片段雜交陽性。5株近平滑念珠菌和1株熱帶念珠菌與2.2～3kb片段有微弱的雜交信號，其他菌均未出現(xiàn)雜交。表明白念CliDNA2.5kb片段可能含有白念種特異性堿基序列，經(jīng)進一步克隆證實后可以作為白念菌種鑒定和種內(nèi)分型的有用探針。 第四，分別用6—氨基己酸光敏生物素和生物素交聯(lián)光敏補骨脂素標記探針進行雜交。經(jīng)A—AP系統(tǒng)顯色，6—氨基己酸光敏生物素標記活性為1pg，標記探針與靶DNA雜交可檢測至100pg以下，與全細胞DNA雜交，檢測敏感性在125pg。其檢測敏感性與同位素探針相同，較光敏補骨脂素高約10倍，另外，兩種光敏生物素標記探
【學位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：1991
【分類號】：R346
【圖文】：

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【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 吳明;基因擴增技術(shù)的一次重大改進[J];生物化學與生物物理進展;1990年04期

2 何笑松;;生物素標記核酸技術(shù)[J];生物工程學報;1986年01期

本文編號：2737166