【摘要】：目的:肝硬化是各種肝臟炎癥性疾病發(fā)展的終末期階段,臨床診斷不能只考慮單一疾病的情況,需要對(duì)全身情況進(jìn)行綜合評(píng)估,發(fā)生肝硬化病變時(shí),可能會(huì)伴隨其他并發(fā)癥的發(fā)生,肝硬化誘發(fā)的其他部位相關(guān)疾病是導(dǎo)致肝硬化死亡率增高的主要原因之一。從病理學(xué)角度對(duì)肝硬化進(jìn)行分析,肝臟組織的表面觀發(fā)生了明顯的改變,顯微鏡下觀察不到活性的肝臟細(xì)胞,視野下充滿大量的壞死細(xì)胞,出現(xiàn)肝硬化的典型結(jié)構(gòu)變化。肝硬化發(fā)生發(fā)展過程復(fù)雜,需要注意多種狀況的發(fā)生,比如腹腔積水、急性大出血、黃疸,肝性腦病等,晚期肝功能檢查呈現(xiàn)明顯異常,病變持續(xù)進(jìn)展,最終因肝功能衰竭而告終。目前肝硬化的臨床診療尚無(wú)效果好的特效藥,并且對(duì)藥物的選擇性強(qiáng),濫用藥物會(huì)加重肝臟處理負(fù)擔(dān),延誤病情,因此需要尋找新的治療手段,提高肝硬化的治療效果。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)作為肝細(xì)胞受到損傷時(shí)修復(fù)的主要來(lái)源,可對(duì)肝臟組織的功能進(jìn)行改善,并且,同其他肝硬化治療手段相比,BMSCs移植具有取材方便、無(wú)排斥反應(yīng)、安全性高及價(jià)格相對(duì)低廉等優(yōu)點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)使用乳鼠的骨髓來(lái)培養(yǎng)BMSCs的原代細(xì)胞,以四氯化碳為主的方法,對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行肝硬化的造模,然后,對(duì)其移植增值能力強(qiáng)的BMSCs,采取有效的手段對(duì)肝硬化恢復(fù)程度進(jìn)行檢測(cè),分析最終的結(jié)果。通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和基礎(chǔ)研究,為臨床的進(jìn)一步應(yīng)用提供更為確實(shí)的證據(jù)和有力的支持。方法:解剖雄性乳鼠,提取骨髓,全骨髓貼壁方法培養(yǎng)BMSCs,原代細(xì)胞進(jìn)行消化傳代,獲取三代以內(nèi)的BMSCs;在培養(yǎng)細(xì)胞表面標(biāo)記單克隆抗體CD11b、CD29、CD31、CD14、CD34、CD45、CD73、CD90、CD105,流式細(xì)胞儀檢測(cè);使用以四氯化碳為主,苯巴比妥鈉為輔的方法對(duì)BALB/C雄性小鼠進(jìn)行肝硬化的造模,普通飲食飲水進(jìn)行飼養(yǎng)的BALB/C雄性小鼠作為對(duì)照組,制備病理切片,兩者結(jié)果進(jìn)行比照參考;移植途徑可以采用兩種方式:肝動(dòng)脈和尾靜脈途徑,移植成功后,觀察實(shí)驗(yàn)組小鼠一段時(shí)間后,肉眼觀察肝臟組織,分析病理切片報(bào)告結(jié)果,得到肝硬化的治療結(jié)果數(shù)據(jù)。結(jié)果:獲得三代以內(nèi)、增值能力強(qiáng)和較為純化的BMSCs;以四氯化碳為主的方法對(duì)BALB/C雄性小鼠進(jìn)行肝硬化造模,病理結(jié)果顯示出肝硬化結(jié)果,造模成功;尾靜脈和肝動(dòng)脈途徑對(duì)肝硬化小鼠移植BMSCs,病理報(bào)告結(jié)果顯示肝硬化程度得到了一定程度的良好改善,兩種途徑治療效果相當(dāng)。結(jié)論:流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果示CD105、CD73、CD29、CD90的陽(yáng)性表達(dá)率≥95%,在培養(yǎng)細(xì)胞表面呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),CD14、CD11b、CD34、CD45、CD31的陽(yáng)性表達(dá)率≤2%,成陰性表達(dá),說明培養(yǎng)的細(xì)胞符合BMSCs的基本特性,可以通過全骨髓貼壁培養(yǎng)法對(duì)BMSCs進(jìn)行培養(yǎng),原代細(xì)胞消化傳代獲得的三代以內(nèi)的培養(yǎng)細(xì)胞,增殖能力強(qiáng),細(xì)胞種類較為純化,可以進(jìn)行對(duì)疾病治療的移植。采用以四氯化碳為主方法對(duì)小鼠進(jìn)行肝硬化模型的建立,肝臟組織發(fā)生明顯的肝硬化改變,病理切片結(jié)果也符合,說明此法可對(duì)小鼠進(jìn)行肝硬化造模。肝動(dòng)脈和尾靜脈途徑移植一定細(xì)胞數(shù)量的BMSCs移植到肝硬化小鼠體內(nèi),肉眼觀察肝臟組織,進(jìn)行HE染色和病理組織切片,結(jié)果顯示肝硬化得到一定程度的改善,兩種途徑對(duì)肝硬化的效果無(wú)明顯差異。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R575.2;R-332

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本文編號(hào)：2735463