【摘要】：目的:肝硬化是各種肝臟炎癥性疾病發(fā)展的終末期階段,臨床診斷不能只考慮單一疾病的情況,需要對全身情況進(jìn)行綜合評估,發(fā)生肝硬化病變時,可能會伴隨其他并發(fā)癥的發(fā)生,肝硬化誘發(fā)的其他部位相關(guān)疾病是導(dǎo)致肝硬化死亡率增高的主要原因之一。從病理學(xué)角度對肝硬化進(jìn)行分析,肝臟組織的表面觀發(fā)生了明顯的改變,顯微鏡下觀察不到活性的肝臟細(xì)胞,視野下充滿大量的壞死細(xì)胞,出現(xiàn)肝硬化的典型結(jié)構(gòu)變化。肝硬化發(fā)生發(fā)展過程復(fù)雜,需要注意多種狀況的發(fā)生,比如腹腔積水、急性大出血、黃疸,肝性腦病等,晚期肝功能檢查呈現(xiàn)明顯異常,病變持續(xù)進(jìn)展,最終因肝功能衰竭而告終。目前肝硬化的臨床診療尚無效果好的特效藥,并且對藥物的選擇性強,濫用藥物會加重肝臟處理負(fù)擔(dān),延誤病情,因此需要尋找新的治療手段,提高肝硬化的治療效果。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)作為肝細(xì)胞受到損傷時修復(fù)的主要來源,可對肝臟組織的功能進(jìn)行改善,并且,同其他肝硬化治療手段相比,BMSCs移植具有取材方便、無排斥反應(yīng)、安全性高及價格相對低廉等優(yōu)點。本實驗使用乳鼠的骨髓來培養(yǎng)BMSCs的原代細(xì)胞,以四氯化碳為主的方法,對實驗小鼠進(jìn)行肝硬化的造模,然后,對其移植增值能力強的BMSCs,采取有效的手段對肝硬化恢復(fù)程度進(jìn)行檢測,分析最終的結(jié)果。通過動物實驗和基礎(chǔ)研究,為臨床的進(jìn)一步應(yīng)用提供更為確實的證據(jù)和有力的支持。方法:解剖雄性乳鼠,提取骨髓,全骨髓貼壁方法培養(yǎng)BMSCs,原代細(xì)胞進(jìn)行消化傳代,獲取三代以內(nèi)的BMSCs;在培養(yǎng)細(xì)胞表面標(biāo)記單克隆抗體CD11b、CD29、CD31、CD14、CD34、CD45、CD73、CD90、CD105,流式細(xì)胞儀檢測;使用以四氯化碳為主,苯巴比妥鈉為輔的方法對BALB/C雄性小鼠進(jìn)行肝硬化的造模,普通飲食飲水進(jìn)行飼養(yǎng)的BALB/C雄性小鼠作為對照組,制備病理切片,兩者結(jié)果進(jìn)行比照參考;移植途徑可以采用兩種方式:肝動脈和尾靜脈途徑,移植成功后,觀察實驗組小鼠一段時間后,肉眼觀察肝臟組織,分析病理切片報告結(jié)果,得到肝硬化的治療結(jié)果數(shù)據(jù)。結(jié)果:獲得三代以內(nèi)、增值能力強和較為純化的BMSCs;以四氯化碳為主的方法對BALB/C雄性小鼠進(jìn)行肝硬化造模,病理結(jié)果顯示出肝硬化結(jié)果,造模成功;尾靜脈和肝動脈途徑對肝硬化小鼠移植BMSCs,病理報告結(jié)果顯示肝硬化程度得到了一定程度的良好改善,兩種途徑治療效果相當(dāng)。結(jié)論:流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果示CD105、CD73、CD29、CD90的陽性表達(dá)率≥95%,在培養(yǎng)細(xì)胞表面呈強陽性表達(dá),CD14、CD11b、CD34、CD45、CD31的陽性表達(dá)率≤2%,成陰性表達(dá),說明培養(yǎng)的細(xì)胞符合BMSCs的基本特性,可以通過全骨髓貼壁培養(yǎng)法對BMSCs進(jìn)行培養(yǎng),原代細(xì)胞消化傳代獲得的三代以內(nèi)的培養(yǎng)細(xì)胞,增殖能力強,細(xì)胞種類較為純化,可以進(jìn)行對疾病治療的移植。采用以四氯化碳為主方法對小鼠進(jìn)行肝硬化模型的建立,肝臟組織發(fā)生明顯的肝硬化改變,病理切片結(jié)果也符合,說明此法可對小鼠進(jìn)行肝硬化造模。肝動脈和尾靜脈途徑移植一定細(xì)胞數(shù)量的BMSCs移植到肝硬化小鼠體內(nèi),肉眼觀察肝臟組織,進(jìn)行HE染色和病理組織切片,結(jié)果顯示肝硬化得到一定程度的改善,兩種途徑對肝硬化的效果無明顯差異。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R575.2;R-332

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 徐燦;肝硬化中內(nèi)皮素的作用及機制[J];國外醫(yī)學(xué)(消化系疾病分冊);2001年02期

2 張蓉,王青蘭;內(nèi)皮素與肝硬化[J];醫(yī)學(xué)信息;2003年01期

3 橈室勇二 ,張臨祥;肝硬化的基因?qū)氙煼╗J];日本醫(yī)學(xué)介紹;2004年08期

4 趙云輝;許乙凱;陳翼;蔣志強;許鵬君;;磁化傳遞對比成像在大鼠肝硬化的初步應(yīng)用[J];臨床放射學(xué)雜志;2006年09期

5 徐安書;文正榮;孫志為;;肝硬化實驗動物模型的研究現(xiàn)狀[J];醫(yī)學(xué)綜述;2010年07期

6 鈕振,李宗明,范維珂,周友梅;實驗性肝硬化的研究[J];重慶醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1985年03期

7 饒金才;黃蘭珍;肖純;彭澤華;;小鼠早期肝硬化模型和組織學(xué)觀察[J];江西醫(yī)藥;1988年04期

8 鐘群;張雪林;;肝硬化的多層螺旋CT灌注成像研究進(jìn)展[J];肝臟;2007年05期

9 郭麗麗;張鐵成;趙明;楊雁萍;張肇慧;王阿櫻;付曠;;四氯化碳法兔肝硬化模型的建立[J];中國實驗診斷學(xué);2011年02期

10 姚光弼;肝硬化研究的現(xiàn)狀及展望[J];新醫(yī)學(xué);1993年09期

相關(guān)會議論文 前5條

1 王新國;;硫化氫影響肝硬化膠原蛋白生成[A];第四屆中國醫(yī)師協(xié)會感染科醫(yī)師大會暨傳染病診治高峰論壇、浙江省醫(yī)學(xué)會肝病、感染病學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2011年

2 李善高;斯淑英;俞蕾敏;孟立娜;呂賓;;瘦素及功能性受體表達(dá)與大鼠肝纖維化/肝硬化關(guān)系的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國消化病學(xué)術(shù)會議論文匯編（上冊）[C];2007年

3 李善高;斯淑英;俞蕾敏;孟立娜;呂賓;;瘦素及功能性受體表達(dá)與大鼠肝纖維化/肝硬化關(guān)系的研究[A];浙江省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會消化專業(yè)第八次學(xué)術(shù)年會暨省中西醫(yī)結(jié)合消化系疾病新進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2007年

4 李善高;斯淑英;俞蕾敏;孟立娜;呂賓;;瘦素及功能性受體表達(dá)與大鼠肝纖維化/肝硬化關(guān)系的研究[A];2007年浙江省消化系疾病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2007年

5 劉軍;孟立娜;李善高;呂賓;;血紅素氧合酶在實驗性肝硬化大鼠門靜脈組織中的表達(dá)及意義[A];第二屆浙江省消化病學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2009年

相關(guān)重要報紙文章 前2條

1 特約記者 王姿英;肝硬化古方劑有了病理證據(jù)[N];健康報;2013年

2 黃 芳;藥茶輔治乙肝有良效[N];中國中醫(yī)藥報;2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前6條

1 陳燕飛;肝硬化患者腸道微生態(tài)研究[D];浙江大學(xué);2013年

2 劉杰;肝硬化模型比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究及扶正化瘀方對血漿蛋白質(zhì)組影響[D];復(fù)旦大學(xué);2007年

3 涂傳濤;環(huán)氧合酶-2在實驗性肝硬化門靜脈高壓形成中的作用[D];復(fù)旦大學(xué);2005年

4 紀(jì)鳳穎;多層螺旋CT灌注成像在肝硬化中的實驗和臨床應(yīng)用研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2007年

5 朱應(yīng)合;經(jīng)肝動脈自體骨髓干細(xì)胞移植治療急、慢性肝病的實驗研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2008年

6 金博;慢性丙型肝炎疫苗的初步研究及肝硬化的實驗治療[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 黎業(yè)娟;趨化軸CXCL12-CXCR4/CXCR7在肝硬化脾亢大鼠脾臟組織中的表達(dá)及意義[D];海南大學(xué);2016年

2 牛艷君;小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對肝硬化模型作用的研究[D];蘭州大學(xué);2016年

3 張俊晶;四氯化碳輔以營養(yǎng)調(diào)控制備豬肝硬化模型的實驗研究[D];內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院;2006年

4 劉悅;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體內(nèi)移植治療肝硬化的初步實驗研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2007年

5 江登豐;肝硬化患者心功能改變研究及其影響因素分析[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

6 彭建平;脾切除影響肝硬化的機理探討[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2001年

7 龔藝貞;新西蘭兔四氯化碳肝硬化模型的建立與黃曲霉毒素B1對該模型肝臟急性損傷作用的觀察[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2008年

8 段峰;介入微創(chuàng)式門靜脈內(nèi)間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療肝硬化可行性的實驗研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2007年

9 陳健龍;四氯化碳誘導(dǎo)大鼠肝硬化模型方法的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2013年

10 丁軼;肝硬化肝癌立體定向照射細(xì)胞因子及病理學(xué)觀察的實驗研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2006年

本文編號：2735463