【摘要】： 目的：人細(xì)小病毒B19是一種可致人類多種疾病的小 DNA病毒，主要經(jīng)呼吸道和血液途徑傳播，可引起社區(qū)局部 流行。自1990年我們首次證實我國存在該病毒感染后，陸續(xù) 報告B19病毒是我國孕婦非免疫性流產(chǎn)、兒童急性再障危象、 急性血小板減少性紫癜等疾病的重要病因之一。同時，我國 婦女和兒童血清中保護(hù)性抗體水平低，易發(fā)生該病毒感染。 尤其免疫功能低下或缺陷患者可發(fā)生持續(xù)感染和慢性貧血， 危及生命。B19病毒是由5.6Kb核苷酸組成，編碼一個非結(jié) 構(gòu)蛋白（NS1）和兩個結(jié)構(gòu)蛋白（VP1、VP2）。B19殼蛋白主要由 VP2蛋白組成，VP1蛋白不超過殼蛋白的10％，其獨特區(qū)暴 第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文 一 露在病毒的表面。B19病毒的抗原表位區(qū)集中在VPI獨特區(qū) 和 VP IVPZ連接區(qū)。只有 HPVB VPI獨特區(qū)和 VPI－VPZ 連接區(qū)基因編碼的蛋白，才能刺激機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性抗體。國 外證明該病毒基因隨地區(qū)不同有較大變異。但流行的病毒中 國株基因是否有變異，國內(nèi)尚無報告�；蚩寺〖暗鞍妆磉_(dá) 技術(shù)，是近年來分子生物學(xué)發(fā)展的重要標(biāo)志。國內(nèi)尚無利用 此技術(shù)研究＊ 病毒基因變異的報道。此方法的開創(chuàng)性引入， 將為改變國內(nèi)目前診斷性試劑依賴進(jìn)口及制備B19病毒疫苗 做出有益的開創(chuàng)性嘗試。本文擬對VPI獨特區(qū)基因克隆，進(jìn) 行基因組核昔酸序列分析及蛋白的初步表達(dá)，研究其基因的 變異。 方法：采用自行設(shè)計的一對引物，以 PCR法從一例 1999 年12月份在本院兒科確診為再生障礙性貧血患兒血清擴(kuò)增 出480hp的VPI獨特區(qū)基因片段，將其與PUC19質(zhì)粒連接。 成功構(gòu)建了VPIP 質(zhì)粒，并進(jìn)行測序分析及初步的蛋白 誘導(dǎo)、表達(dá)，獲得了初步表達(dá)。 結(jié)果：＊與國外己發(fā)表的B19 W株的VPI獨特區(qū)序列 相比，有二處核昔酸發(fā)生改變，占核昔酸總數(shù)的 4二 7％ Q／480人并可致所編碼的氨基酸變化：第2594位由C變?yōu)?A，相應(yīng)的氨基酸由組氨酸變?yōu)樘於影保坏?624位由A變 為G，相應(yīng)的氨基酸由大冬酚氨變?yōu)樘於彼�。重�?fù)3個克 隆，測序結(jié)果同前。u）與國外己發(fā)表的其它株相比，其核昔 酸序列也不完全相同。O）蛋白電泳結(jié)果顯示出新的蛋白電泳 帶，分子量與預(yù)期大小基本相符，為B19病毒的VPI獨特區(qū) 蛋白。 ．。M抄二痞 勻遼．、．．札．乞e．產(chǎn)甜＼j“二 栩C．／／工L民 纂一義梆二凸賊t大二理td盾t—J產(chǎn)J——已N。、、【jH．。二 人心。。＿“卜二1W—．9—地0證以沏0歲o感O邱森】0幽b文0以 －2－ 第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文 一 結(jié)論：（1）本文采用自行設(shè)計引物，用PCR的方法能擴(kuò)增 出目的基因片段，擴(kuò)增產(chǎn)物為480hp。Q）中國B19病毒VPI 獨特區(qū)基因與國外相應(yīng)的基因相比，有 2處變異。o）VPI獨 特區(qū)基因的變異導(dǎo)致了其編碼蛋白的變異。H）VPI獨特區(qū)基 因的成功克隆及相應(yīng)蛋白的初步表達(dá)為制備B19病毒診斷性 試劑及保護(hù)性疫苗、防治B19病毒感染、控制其社區(qū)局部流 行開創(chuàng)了廣闊的前景。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2001
【分類號】：R373

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 成勝權(quán),張國成,許東亮,孫新;巢式PCR檢測關(guān)節(jié)炎患者血清人細(xì)小病毒B19DNA[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;1999年09期

本文編號：2735001