發(fā)布時(shí)間：2020-06-17 02:04

【摘要】：目的：探索實(shí)驗(yàn)條件下人角質(zhì)形成細(xì)胞及成纖維細(xì)胞的體外培養(yǎng)技術(shù)，明確培養(yǎng)的角質(zhì)形成細(xì)胞中是否存在表皮干細(xì)胞，確定表皮干細(xì)胞在皮膚組織中的定位。方法：利用細(xì)胞工程方法進(jìn)行組織分離、原代培養(yǎng)及傳代培養(yǎng)等，觀察細(xì)胞形態(tài)；(1)通過(guò)免疫組化方法，利用角蛋白單克隆抗體對(duì)培養(yǎng)的角質(zhì)形成細(xì)胞進(jìn)行鑒定，并利用表皮干細(xì)胞的相對(duì)特異標(biāo)識(shí)分子—CK19對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)分析：(2)利用波形絲蛋白抗體對(duì)培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞進(jìn)行鑒定；(3)通過(guò)免疫組化方法，利用CK19作為特異標(biāo)識(shí)分子，觀察人表皮干細(xì)胞在不同解剖結(jié)構(gòu)皮膚組織的定位。結(jié)果：1、表皮自真皮較完整分離，電鏡及免疫組化證實(shí)培養(yǎng)細(xì)胞為角質(zhì)形成細(xì)胞，免疫組化結(jié)果顯示：CK反應(yīng)陽(yáng)性，部分細(xì)胞CK19陽(yáng)性，表明有表皮干細(xì)胞存在。2、利用組織塊培養(yǎng)方法，通過(guò)倒置顯微鏡觀察及免疫組化染色進(jìn)行細(xì)胞鑒定并證實(shí)得到較純的成纖維細(xì)胞。3、免疫組化染色發(fā)現(xiàn)CK19陽(yáng)性細(xì)胞位于無(wú)毛區(qū)皮膚組織的基底層，位于有毛區(qū)皮膚組織的毛囊外毛根鞘。結(jié)論：體外分離、培養(yǎng)角質(zhì)形成細(xì)胞及成纖維細(xì)胞成功，且分離得到的角質(zhì)形成細(xì)胞中有表皮干細(xì)胞存在；表皮干細(xì)胞在無(wú)毛區(qū)皮膚組織中位于表皮基底層，在有毛區(qū)皮膚組織中位于毛囊外毛根鞘。為人工皮膚的成功構(gòu)建奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R329
【圖文】：

二、結(jié)果l、角質(zhì)形成細(xì)胞的分離及培養(yǎng)取出經(jīng)disPase酶消化16小時(shí)后的包皮組織，石蠟包埋，行4um厚切片，常規(guī)脫蠟后，行HE染色，組織形態(tài)學(xué)觀察顯示，表皮自真皮分離較完整(見(jiàn)圖1，圖2)，表皮基底層中細(xì)胞基本完整，再聯(lián)合應(yīng)用胰蛋白酶舊Dl人消化表皮，可得到較純凈的角質(zhì)形成細(xì)胞，且可收集到絕大部分的基底層及棘層細(xì)胞。

二、結(jié)果l、角質(zhì)形成細(xì)胞的分離及培養(yǎng)取出經(jīng)disPase酶消化16小時(shí)后的包皮組織，石蠟包埋，行4um厚切片，常規(guī)脫蠟后，行HE染色，組織形態(tài)學(xué)觀察顯示，表皮自真皮分離較完整(見(jiàn)圖1，圖2)，表皮基底層中細(xì)胞基本完整，再聯(lián)合應(yīng)用胰蛋白酶舊Dl人消化表皮，可得到較純凈的角質(zhì)形成細(xì)胞，且可收集到絕大部分的基底層及棘層細(xì)胞。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 伍津津,劉榮卿,葉慶佾,唐書謙,鐘白玉;人工皮膚培養(yǎng)模型的建立[J];重慶醫(yī)學(xué);1999年04期

2 劉杰,王德文,徐龍河,崔雪梅,陳浩宇,谷慶陽(yáng),張燕;人表皮細(xì)胞分離培養(yǎng)最佳條件的選擇[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2002年03期

3 于慧敏,喬惠珍,其木格;皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)的改良法[J];中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志;1999年03期

本文編號(hào)：2716914