【摘要】： 細胞內(nèi)信號轉導是細胞行使其生理功能的重要過程。通過信號轉導途徑，細胞可 以感知外來刺激并引起自身生理，生化的改變，繼而導致細胞形態(tài)和功能的異常，成 為許多疾病的病理基礎。血管內(nèi)皮細胞被覆于血管最內(nèi)層，不斷受到血流動力學因素 的影響，因而機械力（主要是剪切力）可能是重要的致病因素。本文的目的是以腦微 血管內(nèi)皮為實驗對象，通過免疫組織化學方法以及全細胞膜片鉗的電生理方法，研究 細胞對流體力的反應，并探討細胞內(nèi)的信號轉導途徑，為微血管內(nèi)皮細胞的研究提供 重要的實驗數(shù)據(jù)。 本實驗首先采用免疫組織化學方法，對不同時間和大小的剪切力作用下癌基因蛋白 c-fos的表達進行了研究。圖象分析測量結果提示，腦微血管內(nèi)皮細胞在剪切力作用下， c-fos蛋白有明顯的表達且顯示了剪切力水平的依賴性。當剪切力大小為0.14×10~(-5) N/cm~2時，內(nèi)皮細胞核內(nèi)的灰度值在1.5h時最低，與正常組相比有極顯著差異 （p＜0.001），說明c-fos的表達量最高。3h后灰度值反而升高，顯示c-fos量的減 少。剪切力增加一倍達到0.28×10~(-5)N/cm~2時，作用2h可見灰度降低有顯著差異 （p＜0.05），說明了c-fos有顯著表達增高，，但與1.5h作用后的無顯著差異。實驗同 時發(fā)現(xiàn)過度的剪切力作用可以引起內(nèi)皮細胞皺縮、損傷、脫落，這時的c-fos會有過度 的表達。 其次本文用電生理方法研究了正常微血管內(nèi)皮細胞的機械敏感性離子通道。采用 膜片鉗技術以全細胞方式在鼠腦微血管內(nèi)皮細胞中記錄到一種延遲外向電流，對K~+具 有高度特異性，胞外施加20mmol/L的TEA-Cl可明顯抑制該電流。該電流具有TEA 濃度依賴性，其IC50約為2.0mmol/L，符合延遲整流性鉀電流特征（IKv）。機械力作 用下可引出一外向電流，此電流特征亦符合IKv，說明微血管內(nèi)皮細胞上也存在機械 敏感性通道，并且這種通道不同于以往在內(nèi)皮細胞上發(fā)現(xiàn)的機械力激活的內(nèi)向整流性 通道。 以上研究證實了腦微血管內(nèi)皮細胞對流體機械力反應至少涉及兩個信號轉導途徑 的參與，其一是涉及癌基因c-fos的蛋白激酶途徑，其二是細胞上機械敏感性離子通的 激活。這兩條途徑相互作用，彼此影響，共同調(diào)節(jié)著內(nèi)皮細胞的的形態(tài)與功能。 【學位授予單位】：北京工業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2000
【分類號】：Q68;R363

【參考文獻】

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1 胡金麟,李玉珍,宋欣;剪切力對腦微血管內(nèi)皮細胞骨架蛋白的影響[J];生物物理學報;1998年04期

本文編號：2712112