【摘要】： 目的 人類的成功妊娠需要來(lái)自胎兒的滋養(yǎng)層細(xì)胞對(duì)子宮基質(zhì)的有節(jié)制地侵入。滋養(yǎng)細(xì)胞的侵入作用與其周圍環(huán)境有著密切的聯(lián)系，其中子宮蛻膜組織對(duì)其的影響尤為重要。先前研究表明，蛻膜細(xì)胞條件培養(yǎng)液(decidual cell conditioned media，DCM)能夠阻止早孕滋養(yǎng)細(xì)胞的侵入，然而其具體機(jī)制尚未闡明。本研究首先觀察DCM對(duì)早孕滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲相關(guān)調(diào)節(jié)基因(包括MMPs、TIMP、uPA、PAI等)表達(dá)的影響，其次探討細(xì)胞內(nèi)MAPK信號(hào)通路對(duì)妊娠相關(guān)因子誘導(dǎo)早孕滋養(yǎng)細(xì)胞表達(dá)MMP-9的作用，最后進(jìn)一步研究MAPK對(duì)人JAR細(xì)胞侵襲相關(guān)調(diào)節(jié)基因表達(dá)的作用，以及對(duì)其體外侵襲的影響。盡可能地弄清DCM的作用機(jī)制，以及MAPK是否參與了滋養(yǎng)細(xì)胞節(jié)制性侵入行為的調(diào)節(jié)。 方法 利用原代培養(yǎng)細(xì)胞技術(shù)培養(yǎng)人早孕滋養(yǎng)細(xì)胞、蛻膜細(xì)胞以及人JAR細(xì)胞系，制作DCM。用RT-PCR檢測(cè)各基因表達(dá)的變化。用細(xì)胞ELISA法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)激酶活性。用Transwell細(xì)胞侵入系統(tǒng)檢測(cè)細(xì)胞的體外侵襲作用；用MTT法評(píng)價(jià)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況。 結(jié)果 1．早孕和晚孕DCM均能下調(diào)早孕滋養(yǎng)細(xì)胞MMP-2、MMP-9、uPAmRNA的表達(dá)，而上調(diào)TIMP-1mRNA的表達(dá)。早孕、晚孕DCM均能誘導(dǎo)滋養(yǎng)細(xì)胞PAI-1mRNA的表達(dá)，但對(duì)TIMP-2mRNA的表達(dá)未見有影響。 2．經(jīng)IL-1β、TNF-α、PMA處理24h后，滋養(yǎng)細(xì)胞MMP-9基因表達(dá)顯著增高，EGF對(duì)MMP-9基因表達(dá)僅見輕微的上調(diào)，而IL-10顯著抑 制 MMP習(xí)基因的表達(dá)。我們發(fā)現(xiàn) ILl6、TN’F化以及 PMA均能迅速激 活CTB細(xì)胞的ERK、lqK、p38激酶活性。上述因素刺激引起MMP習(xí) mRNA表達(dá)顯著增加，其能被ERK或p38的特異性抑制劑所抑制。 3．P啪誘導(dǎo)JAR細(xì)胞MMP上、MMP習(xí)、uPA mRNA表達(dá)顯著增 加，其能被PD098059或SB203580所抑制，但存在差異性。PD098059 可明顯抑制UMP－ZmRNA的表達(dá)。 p．PMA能促進(jìn)人絨癌JAR細(xì)胞的體外侵襲作用，而p38特異性抑 制劑SB203580抑制了JAR細(xì)胞的侵襲能力。 結(jié)論 1．蛻膜細(xì)胞條件培養(yǎng)液可調(diào)節(jié)早孕滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲相關(guān)基因的表達(dá)。 2．蛻膜細(xì)胞可能通過(guò)分泌某些因子激活或抑制細(xì)胞內(nèi)MAPK信號(hào) 通路以調(diào)節(jié)滋養(yǎng)細(xì)胞MMP－2、MMP－9、TIMP－l、uPA、PAI－l等基因的 表達(dá)，從而影響滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲能力。 3．MAPK可能參與了滋養(yǎng)細(xì)胞多種侵襲相關(guān)基因表達(dá)的調(diào)控，其與 滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲行為有著密切關(guān)系。 【學(xué)位授予單位】：第一軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號(hào)】：R321

【圖文】：

M人PK活性的影響，用細(xì)胞ELISA法檢測(cè)滋養(yǎng)細(xì)胞中MAPK的相對(duì)激酶活性。結(jié)果顯示，10nM、100nMPMA均能迅速激活ERK、JNK和p38。我們僅提供了JAR細(xì)胞中p38活性變化。(見圖l)另外，我們還觀察了p38MApK的選擇性抑制劑SBZo358o對(duì)JAR細(xì)胞p38MA衛(wèi)K激酶活性的影響，結(jié)果顯示，SB203580可呈濃度依賴的方式抑制100nMPMA對(duì)p38MApK的激活。(見圖2)

M人PK活性的影響，用細(xì)胞ELISA法檢測(cè)滋養(yǎng)細(xì)胞中MAPK的相對(duì)激酶活性。結(jié)果顯示，，10nM、100nMPMA均能迅速激活ERK、JNK和p38。我們僅提供了JAR細(xì)胞中p38活性變化。(見圖l)另外，我們還觀察了p38MApK的選擇性抑制劑SBZo358o對(duì)JAR細(xì)胞p38MA衛(wèi)K激酶活性的影響，結(jié)果顯示，SB203580可呈濃度依賴的方式抑制100nMPMA對(duì)p38MApK的激活。(見圖2)

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 張曦倩;ERK信號(hào)傳導(dǎo)通路在滋養(yǎng)層細(xì)胞侵襲過(guò)程中的作用[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2005年

本文編號(hào)：2712211