【摘要】： 目的 制備具有中和人巨細(xì)胞病毒(HCMV)感染作用的單克隆抗體并對其進(jìn)行生 物學(xué)活性鑒定。探討單克隆抗體在臨床上的診斷和治療作用。方法 用HCMV AD169株抗原免疫Balb／c小鼠5-6次后，取致敏的脾細(xì)胞和HGPRT SP2／0小鼠骨 髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，在HAT選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)二周，間接ELISA法篩選陽性克隆， 挑取分泌抗體的雜交瘤株：再用間接ELISA進(jìn)行鑒定，最終獲得抗HCMV的陽性 雜交瘤細(xì)胞4株，用瓊脂糖免疫雙擴(kuò)散法鑒定McAbs的亞類。取腹水經(jīng)鹽析法初 次提純HCMV McAbs。Lowry法測定蛋白質(zhì)濃度。在第6代HF細(xì)胞株上進(jìn)行微 量中和試驗(yàn)；同時(shí)用辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記D7株McAb。結(jié)果 獲得了4 株雜交瘤細(xì)胞株，制備的McAbs經(jīng)間接ELISA和瓊脂雙擴(kuò)散試驗(yàn)證實(shí)均能和 HCMV抗原結(jié)合，顯示高度特異性。McAbs經(jīng)鹽析后D7株蛋白質(zhì)濃度為 11． 2mg／ml，B5株蛋白質(zhì)濃度13． 8mg／ml。其中D7株雜交瘤分泌的McAb經(jīng)間接 ELISA和Western-blotting試驗(yàn)證明能和HCMV pp65抗原特異性結(jié)合。微量中和 實(shí)驗(yàn)亦證實(shí)該McAb具有中和抗體的性質(zhì)。經(jīng)HRP標(biāo)記的該McAb(中和效價(jià)≥1： 128) 還能與細(xì)胞培養(yǎng)中的AD169株HCMV發(fā)生特異性核內(nèi)及胞漿內(nèi)染色反應(yīng)， 且比間接免疫酶染法更快速、敏感、簡便。結(jié)論 通過雜交瘤技術(shù)制備的抗HCMV pp65 McAb能和HCMV特異性結(jié)合并能在體外中和HCMV致細(xì)胞病變效應(yīng)，為 臨床快速、準(zhǔn)確診斷HCMV活動(dòng)性感染提供了有力試劑；抗為McAb作為HCMV 治療藥物的研發(fā)奠定了基礎(chǔ)。
【圖文】：

1長玉IV在HF組鮑1的CPE(xl仍)

瘤細(xì)胞折光性差，細(xì)胞壁皺縮。但可見少量形態(tài)良好、透亮的細(xì)胞。融合后第4一8天:SPZ/O細(xì)胞幾乎全部消失，可見呈葡萄串狀分布的融合細(xì)胞小集落克隆，透亮，折光性強(qiáng)。如圖4。融合后第8一9天:細(xì)胞克隆迅速增大，，待克隆生長至培養(yǎng)孔1/3一1/2面積時(shí)，即可對所有克隆生長孔的培養(yǎng)上清進(jìn)行檢測。如圖5。(圖4)雜交瘤細(xì)胞克隆(4一8天)F194:Hybridomaelone(4一sd)(圖5)雜交瘤細(xì)胞克隆(8一天)F195:Hybridomaelone(8一gd)3.4計(jì)算雜交瘤細(xì)胞融合率根據(jù)間接ELISA法測定克隆培養(yǎng)上清結(jié)果，計(jì)算融合率。本次實(shí)驗(yàn)融合后在96孔板出現(xiàn)的雜交瘤數(shù)目為60孔，融合率為62.5%
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：2697445