本文關(guān)鍵詞：微柱陣列型拓撲結(jié)構(gòu)增強HepG2細胞TRPV通道的功能響應性，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：制備了微柱名義直徑為4μm或10μm,名義間距為4μm或7μm,名義高度為4μm的聚二甲基硅氧烷微柱陣列型拓撲結(jié)構(gòu)基底,研究了Hep G2細胞與拓撲結(jié)構(gòu)基底復合后細胞瞬時受體電位通道TRPV1、TRPV4在基因和蛋白水平的表達及其功能響應性。細胞TRPV1和TRPV4在基因水平表達的評價采用定量PCR技術(shù)進行;TRPV1和TRPV4在蛋白水平的表達以免疫印跡和免疫熒光染色確認;TRPV1和TRPV4功能響應性的研究系以TRPV1和TRPV4激動劑辣椒素和4α-佛波醇-12,13-二葵酸酯刺激細胞,采用鈣離子染料鈣綠-1結(jié)合激光共聚焦顯微技術(shù)記錄鈣內(nèi)流動態(tài)過程,以鈣內(nèi)流熒光響應幅度及陽性響應比率進行評價。實驗結(jié)果表明,Hep G2細胞接種于4種拓撲結(jié)構(gòu)基底較之于平面基底上出現(xiàn)明顯的形態(tài)鋪展和極化程度變化。四種拓撲結(jié)構(gòu)基底上細胞TRPV1和TRPV4的m RNA表達量均顯著高于平面基底上相應值。且相同微柱間距(4μm、7μm),較大微柱直徑(10μm)的基底促進細胞鋪展,同時伴隨著較高的TRPV1或TRPV4基因表達水平;相同微柱直徑(4μm或10μm),較小微柱間距(4μm)的基底一定程度促進細胞鋪展,但卻伴隨著較低的TRPV1或TRPV4基因表達水平。免疫印跡實驗證實了TRPV1和TRPV4在蛋白水平的表達,且拓撲結(jié)構(gòu)基底上TRPV1和TRPV4免疫熒光染色強度較之平面基底相應值明顯增高或趨于增高。在激動劑作用下,TRPV1介導的鈣內(nèi)流表現(xiàn)為快速去敏感化(25秒內(nèi))的瞬態(tài)內(nèi)流,且拓撲結(jié)構(gòu)基底上陽性響應細胞比例或相對熒光響應幅度較之平面基底相應值增高;而拓撲結(jié)構(gòu)基底上細胞TRPV4陽性響應細胞比例和相對熒光響應幅度較之平面基底均全面明顯升高。上述結(jié)果表明,TRPV介導的離子信號可能是基底拓撲結(jié)構(gòu)優(yōu)化Hep G2細胞功能表型的重要信號機制。
【關(guān)鍵詞】：HepG2細胞 PDMS微柱陣列拓撲結(jié)構(gòu) 激光共聚焦顯微技術(shù) TRPV1通道 TRPV4通道
【學位授予單位】：重慶大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要3-4
• 英文摘要4-9
• 1 緒論9-18
• 1.1 問題的提出和研究意義9-10
• 1.1.1 問題的提出9-10
• 1.1.2 研究意義10
• 1.2 國內(nèi)外研究進展簡介10-16
• 1.2.1 拓撲結(jié)構(gòu)基底對細胞影響的研究概況10-12
• 1.2.2 肝細胞鈣離子通道研究概況12-14
• 1.2.3 TRPV鈣離子通道研究概況14-16
• 1.3 研究目的和研究內(nèi)容16
• 1.3.1 研究目的16
• 1.3.2 研究內(nèi)容16
• 1.4 技術(shù)路線16-17
• 1.5 創(chuàng)新點17-18
• 2 PDMS微柱陣列結(jié)構(gòu)的加工及其與HepG2 細胞的復合18-23
• 2.1 實驗儀器、試劑和材料18
• 2.1.1 實驗儀器18
• 2.1.2 試劑和材料18
• 2.2 實驗方法和步驟18-20
• 2.2.1 PDMS微柱陣列型拓撲結(jié)構(gòu)基底的設計和制備18-20
• 2.2.2 HepG2 人肝腫瘤細胞株的培養(yǎng)20
• 2.2.3 HepG2 細胞與PDMS微柱陣列結(jié)構(gòu)及平面基底的復合培養(yǎng)20
• 2.2.4 掃描電子顯微鏡制樣及觀察20
• 2.3 實驗結(jié)果20-22
• 2.3.1 HepG2 細胞與PDMS拓撲結(jié)構(gòu)和平面基底的復合20-22
• 2.4 討論和分析22
• 2.5 本章小結(jié)22-23
• 3 PDMS平面基底和微柱陣列型拓撲結(jié)構(gòu)基底上HepG2 細胞TRPV通道蛋白相關(guān)mRNA的表達23-31
• 3.1 實驗儀器和試劑材料23-24
• 3.1.1 實驗儀器23
• 3.1.2 試劑和材料23-24
• 3.2 實驗方法和步驟24-27
• 3.2.1 樣本中HepG2 細胞總RNA提取24
• 3.2.2 總RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA24-25
• 3.2.3 實時熒光定量PCR反應25-26
• 3.2.4 2%瓊脂糖凝膠電泳檢測26-27
• 3.2.5 統(tǒng)計學處理27
• 3.3 實驗結(jié)果27-29
• 3.3.1 HepG2 細胞中TRPV通道蛋白相關(guān)mRNA表達的確認27-28
• 3.3.2 拓撲結(jié)構(gòu)基底對HepG2 細胞TRPV1 和TRPV4mRNA表達的影響28-29
• 3.4 討論與分析29
• 3.5 本章小結(jié)29-31
• 4 PDMS平面基底和微柱陣列型拓撲結(jié)構(gòu)基底上HepG2 細胞TRPV1、TRPV4 通道蛋白的表達31-39
• 4.1 實驗儀器和材料試劑31-33
• 4.1.1 實驗儀器31
• 4.1.2 試劑和材料31-33
• 4.2 實驗方法和步驟33-34
• 4.2.1 樣本中HepG2 細胞總蛋白提取33
• 4.2.2 免疫印跡實驗33-34
• 4.2.3 免疫熒光染色實驗34
• 4.2.4 統(tǒng)計學處理34
• 4.3 實驗結(jié)果34-37
• 4.3.1 拓撲結(jié)構(gòu)基底和平面基底上HepG2 細胞TRPV1 和TRPV4 蛋白表達的確認34-35
• 4.3.2 拓撲結(jié)構(gòu)基底對HepG2 細胞TRPV1 和TRPV4 蛋白表達的影響35-37
• 4.4 討論與分析37
• 4.5 本章小結(jié)37-39
• 5 PDMS平面基底和微柱陣列型拓撲結(jié)構(gòu)基底上HepG2 細胞TRPV1、TRPV4 通道的功能響應性39-46
• 5.1 實驗儀器和材料試劑39-40
• 5.1.1 實驗器材39
• 5.1.2 試劑和材料39-40
• 5.2 實驗方法和步驟40
• 5.2.1 TRPV1 和TRPV4 功能響應的評價40
• 5.2.2 統(tǒng)計學處理40
• 5.3 實驗結(jié)果40-43
• 5.3.1 拓撲結(jié)構(gòu)基底對HepG2 細胞TRPV1、TRPV4 通道功能響應性的影響40-43
• 5.4 討論與分析43-44
• 5.5 本章小結(jié)44-46
• 6 主要結(jié)論及后續(xù)工作展望46-48
• 6.1 主要結(jié)論46-47
• 6.2 后續(xù)工作展望47-48
• 致謝48-49
• 參考文獻49-56
• 附錄56
• A. 作者在攻讀碩士期間科研成果56
• B. 作者在攻讀碩士學位期間參加的科研項目情況56

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  本文關(guān)鍵詞：微柱陣列型拓撲結(jié)構(gòu)增強HepG2細胞TRPV通道的功能響應性，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：269497