本文關(guān)鍵詞：微柱陣列型拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)增強HepG2細(xì)胞TRPV通道的功能響應(yīng)性，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：制備了微柱名義直徑為4μm或10μm,名義間距為4μm或7μm,名義高度為4μm的聚二甲基硅氧烷微柱陣列型拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基底,研究了Hep G2細(xì)胞與拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基底復(fù)合后細(xì)胞瞬時受體電位通道TRPV1、TRPV4在基因和蛋白水平的表達(dá)及其功能響應(yīng)性。細(xì)胞TRPV1和TRPV4在基因水平表達(dá)的評價采用定量PCR技術(shù)進(jìn)行;TRPV1和TRPV4在蛋白水平的表達(dá)以免疫印跡和免疫熒光染色確認(rèn);TRPV1和TRPV4功能響應(yīng)性的研究系以TRPV1和TRPV4激動劑辣椒素和4α-佛波醇-12,13-二葵酸酯刺激細(xì)胞,采用鈣離子染料鈣綠-1結(jié)合激光共聚焦顯微技術(shù)記錄鈣內(nèi)流動態(tài)過程,以鈣內(nèi)流熒光響應(yīng)幅度及陽性響應(yīng)比率進(jìn)行評價。實驗結(jié)果表明,Hep G2細(xì)胞接種于4種拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基底較之于平面基底上出現(xiàn)明顯的形態(tài)鋪展和極化程度變化。四種拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基底上細(xì)胞TRPV1和TRPV4的m RNA表達(dá)量均顯著高于平面基底上相應(yīng)值。且相同微柱間距(4μm、7μm),較大微柱直徑(10μm)的基底促進(jìn)細(xì)胞鋪展,同時伴隨著較高的TRPV1或TRPV4基因表達(dá)水平;相同微柱直徑(4μm或10μm),較小微柱間距(4μm)的基底一定程度促進(jìn)細(xì)胞鋪展,但卻伴隨著較低的TRPV1或TRPV4基因表達(dá)水平。免疫印跡實驗證實了TRPV1和TRPV4在蛋白水平的表達(dá),且拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基底上TRPV1和TRPV4免疫熒光染色強度較之平面基底相應(yīng)值明顯增高或趨于增高。在激動劑作用下,TRPV1介導(dǎo)的鈣內(nèi)流表現(xiàn)為快速去敏感化(25秒內(nèi))的瞬態(tài)內(nèi)流,且拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基底上陽性響應(yīng)細(xì)胞比例或相對熒光響應(yīng)幅度較之平面基底相應(yīng)值增高;而拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基底上細(xì)胞TRPV4陽性響應(yīng)細(xì)胞比例和相對熒光響應(yīng)幅度較之平面基底均全面明顯升高。上述結(jié)果表明,TRPV介導(dǎo)的離子信號可能是基底拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)優(yōu)化Hep G2細(xì)胞功能表型的重要信號機制。
【關(guān)鍵詞】：HepG2細(xì)胞 PDMS微柱陣列拓?fù)浣Y(jié)構(gòu) 激光共聚焦顯微技術(shù) TRPV1通道 TRPV4通道
【學(xué)位授予單位】：重慶大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要3-4
• 英文摘要4-9
• 1 緒論9-18
• 1.1 問題的提出和研究意義9-10
• 1.1.1 問題的提出9-10
• 1.1.2 研究意義10
• 1.2 國內(nèi)外研究進(jìn)展簡介10-16
• 1.2.1 拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基底對細(xì)胞影響的研究概況10-12
• 1.2.2 肝細(xì)胞鈣離子通道研究概況12-14
• 1.2.3 TRPV鈣離子通道研究概況14-16
• 1.3 研究目的和研究內(nèi)容16
• 1.3.1 研究目的16
• 1.3.2 研究內(nèi)容16
• 1.4 技術(shù)路線16-17
• 1.5 創(chuàng)新點17-18
• 2 PDMS微柱陣列結(jié)構(gòu)的加工及其與HepG2 細(xì)胞的復(fù)合18-23
• 2.1 實驗儀器、試劑和材料18
• 2.1.1 實驗儀器18
• 2.1.2 試劑和材料18
• 2.2 實驗方法和步驟18-20
• 2.2.1 PDMS微柱陣列型拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基底的設(shè)計和制備18-20
• 2.2.2 HepG2 人肝腫瘤細(xì)胞株的培養(yǎng)20
• 2.2.3 HepG2 細(xì)胞與PDMS微柱陣列結(jié)構(gòu)及平面基底的復(fù)合培養(yǎng)20
• 2.2.4 掃描電子顯微鏡制樣及觀察20
• 2.3 實驗結(jié)果20-22
• 2.3.1 HepG2 細(xì)胞與PDMS拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)和平面基底的復(fù)合20-22
• 2.4 討論和分析22
• 2.5 本章小結(jié)22-23
• 3 PDMS平面基底和微柱陣列型拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基底上HepG2 細(xì)胞TRPV通道蛋白相關(guān)mRNA的表達(dá)23-31
• 3.1 實驗儀器和試劑材料23-24
• 3.1.1 實驗儀器23
• 3.1.2 試劑和材料23-24
• 3.2 實驗方法和步驟24-27
• 3.2.1 樣本中HepG2 細(xì)胞總RNA提取24
• 3.2.2 總RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA24-25
• 3.2.3 實時熒光定量PCR反應(yīng)25-26
• 3.2.4 2%瓊脂糖凝膠電泳檢測26-27
• 3.2.5 統(tǒng)計學(xué)處理27
• 3.3 實驗結(jié)果27-29
• 3.3.1 HepG2 細(xì)胞中TRPV通道蛋白相關(guān)mRNA表達(dá)的確認(rèn)27-28
• 3.3.2 拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基底對HepG2 細(xì)胞TRPV1 和TRPV4mRNA表達(dá)的影響28-29
• 3.4 討論與分析29
• 3.5 本章小結(jié)29-31
• 4 PDMS平面基底和微柱陣列型拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基底上HepG2 細(xì)胞TRPV1、TRPV4 通道蛋白的表達(dá)31-39
• 4.1 實驗儀器和材料試劑31-33
• 4.1.1 實驗儀器31
• 4.1.2 試劑和材料31-33
• 4.2 實驗方法和步驟33-34
• 4.2.1 樣本中HepG2 細(xì)胞總蛋白提取33
• 4.2.2 免疫印跡實驗33-34
• 4.2.3 免疫熒光染色實驗34
• 4.2.4 統(tǒng)計學(xué)處理34
• 4.3 實驗結(jié)果34-37
• 4.3.1 拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基底和平面基底上HepG2 細(xì)胞TRPV1 和TRPV4 蛋白表達(dá)的確認(rèn)34-35
• 4.3.2 拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基底對HepG2 細(xì)胞TRPV1 和TRPV4 蛋白表達(dá)的影響35-37
• 4.4 討論與分析37
• 4.5 本章小結(jié)37-39
• 5 PDMS平面基底和微柱陣列型拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基底上HepG2 細(xì)胞TRPV1、TRPV4 通道的功能響應(yīng)性39-46
• 5.1 實驗儀器和材料試劑39-40
• 5.1.1 實驗器材39
• 5.1.2 試劑和材料39-40
• 5.2 實驗方法和步驟40
• 5.2.1 TRPV1 和TRPV4 功能響應(yīng)的評價40
• 5.2.2 統(tǒng)計學(xué)處理40
• 5.3 實驗結(jié)果40-43
• 5.3.1 拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基底對HepG2 細(xì)胞TRPV1、TRPV4 通道功能響應(yīng)性的影響40-43
• 5.4 討論與分析43-44
• 5.5 本章小結(jié)44-46
• 6 主要結(jié)論及后續(xù)工作展望46-48
• 6.1 主要結(jié)論46-47
• 6.2 后續(xù)工作展望47-48
• 致謝48-49
• 參考文獻(xiàn)49-56
• 附錄56
• A. 作者在攻讀碩士期間科研成果56
• B. 作者在攻讀碩士學(xué)位期間參加的科研項目情況56

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  本文關(guān)鍵詞：微柱陣列型拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)增強HepG2細(xì)胞TRPV通道的功能響應(yīng)性，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：269497