【摘要】：目的 為了獲得鼠胚與人早孕蛻膜單層細(xì)胞的共培養(yǎng)系統(tǒng)；觀察鼠胚與人早孕蛻膜傳代的單層細(xì)胞及凍融的單層細(xì)胞共培養(yǎng)的效果，便于今后作反復(fù)種植失敗夫婦胚胎與其凍融的自體增殖晚期-分泌早期子宮內(nèi)膜單層細(xì)胞共培養(yǎng)以提高妊娠率。 方法 經(jīng)過細(xì)胞培養(yǎng)、傳代獲得蛻膜單層細(xì)胞；冷凍保存、解凍復(fù)蘇后接種獲得凍融蛻膜單層細(xì)胞；對單層細(xì)胞作免疫組織化學(xué)檢查其雌、孕激素受體的表達(dá)。觀察昆明白小鼠單細(xì)胞受精卵與傳代的、凍融的人子宮蛻膜單層細(xì)胞共培養(yǎng)(A，，B兩組)及僅用培養(yǎng)液培養(yǎng)的對照組(C組)的胚胎發(fā)育情況。分析A，B組與C組；A，B組之間各期鼠胚的發(fā)育情況及8-細(xì)胞期A類胚胎形成情況。 結(jié)果 1 人早孕蛻膜細(xì)胞有良好的體外培養(yǎng)活力，易于獲得培養(yǎng)及傳代。 2 凍融的蛻膜單層細(xì)胞成功地獲得，經(jīng)免疫組織化學(xué)檢查其雌、孕激素受體同樣陽性表達(dá)，具有子宮內(nèi)膜細(xì)胞的特點(diǎn)。 3 成功地獲得昆明白小鼠超促排卵后的單細(xì)胞受精卵。分別與傳代及凍融的蛻膜細(xì)胞共培養(yǎng)獲得囊胚孵出。 4 共培養(yǎng)對分裂期鼠胚發(fā)育的影響A、B、C三組的2-細(xì)胞期形成率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，A組在4-細(xì)胞形成率上高于B、C組。隨著培養(yǎng)時(shí)間的逐漸延長，A、B與C組8-細(xì)胞期形成率經(jīng)x~2檢驗(yàn)，有顯著性差異，而A、B組之間無顯著性差異。 5 共培養(yǎng)對種植前鼠胚發(fā)育的影響A、B組胚胎桑椹期、早期囊胚和擴(kuò)張囊胚期的形成率與C組相比有顯著性差異。同樣，A、B組之間無顯著性差異。 安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 6共培養(yǎng)對8一細(xì)胞鼠胚體外培養(yǎng)胚胎質(zhì)量的影響A、B組在8一細(xì)胞階段A、B類 胚胎形成率與C組相比，差異有顯著性。同樣A、B組之間的A、B類胚胎形成率無 顯著性差異。 7培養(yǎng)后的培養(yǎng)液病原學(xué)檢查結(jié)果培養(yǎng)多日的共培養(yǎng)的培養(yǎng)液經(jīng)檢查，細(xì)菌及 真菌均陰性。 結(jié)論 1人早孕蛻膜單層細(xì)胞與鼠胚共培養(yǎng)系統(tǒng)的建立為進(jìn)一步作胚胎共培養(yǎng)效果的分 析及胚胎細(xì)胞凋亡等共培養(yǎng)機(jī)制的探討提供了可操作的方法。 2新鮮傳代或凍融的人早孕子宮蛻膜單層細(xì)胞作為輔助細(xì)胞在鼠胚的發(fā)育中起到 了促進(jìn)作用，該結(jié)果為人胚胎與其凍融的自體子宮增殖晚期一分泌早期的內(nèi)膜單 層細(xì)胞共培養(yǎng)的研究提供了可行性分析。 3嚴(yán)格無菌操作情況下，共培養(yǎng)系統(tǒng)可避免污染，安全可靠。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號(hào)】：R329

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本文編號(hào)：2694643