【摘要】：白細(xì)胞分化抗原(CD)是人血細(xì)胞上一組抗原決定簇，是當(dāng)代生命科學(xué)研究的前沿領(lǐng)域之一。自1982年以來(lái)，已召開(kāi)了五屆人類白細(xì)胞分化抗原國(guó)際會(huì)議，并已命名了130多個(gè)CD。在這些CD中，特異地表達(dá)于B細(xì)胞的不多，其中僅表達(dá)于活化B細(xì)胞者尤少。我們?cè)?jīng)報(bào)道了表達(dá)于人活化B細(xì)胞的分化抗原5C5。 為了確認(rèn)5C5抗原是否是一個(gè)新的分化抗原，及進(jìn)一步研究它的結(jié)構(gòu)和功能，我們用本實(shí)驗(yàn)室制備的單克隆抗體5C5制備親和層析柱，從本實(shí)驗(yàn)室建立的人活化B細(xì)胞株3D5細(xì)胞的膜蛋白質(zhì)中分離、純化到相應(yīng)的分化抗原5C5，并用該抗原免疫小鼠，經(jīng)多次克隆，篩選到一個(gè)雜交瘤細(xì)胞株5C5-G1。它所分泌的單抗與單抗5C5識(shí)別同一分化抗原。Westernblot印跡分析顯示，該分化抗原在SDS-PAGE(還原條件下)中有五條帶，分子量分別為92KD、52KD(二條)、40KD和20KD。免疫沉淀顯示92KD和52KD兩條帶。流式細(xì)胞儀分析表明，單抗5C5-G1和單抗5C5識(shí)別的分化抗原表達(dá)于相同的細(xì)胞，即人活化B細(xì)胞和人活化B細(xì)胞株3D5(強(qiáng)陽(yáng)性)、和Daudi(弱陽(yáng)性)，而在靜止B細(xì)胞、活化T及靜止T細(xì)胞、單核細(xì)胞、以及T細(xì)胞株CEM、Jurkat和Peer沒(méi)有表達(dá)，在K562細(xì)胞上也沒(méi)有表達(dá)，，在U937細(xì)胞上僅有極弱的表達(dá)。 用單抗5C5-G1和單抗5C5的混合物分別從人扁桃體細(xì)胞λgt11cDNA文庫(kù)和3D5細(xì)胞λgt11 cDNA文庫(kù)中篩選到3個(gè)和7個(gè)陽(yáng)性克隆。把從扁桃體細(xì)胞cDNA庫(kù)所得陽(yáng)性克隆的cDNA插入到質(zhì)粒pUC18中，用雙鏈雙脫氧測(cè)序法完成了核苷酸序列分析，其中一個(gè)長(zhǎng)613bp，另外二個(gè)長(zhǎng)467bp，后者與前者的前467bp完全重疊。613bp cDNA中有一個(gè)開(kāi)放閱讀框架，從103bp到429bp，共327bp。Northern blot分析顯示，此613bp cDNA與人扁桃體和3D5細(xì)胞的RNA在2.0Kb
【圖文】：

305細(xì)胞膜蛋白親和層融合后的細(xì)胞共有438IsA法篩選出分泌抗小鼠析表明，這107個(gè)孔中有CEM細(xì)胞不反應(yīng)，但反流式細(xì)胞儀分析圖。t0rnb}。t分析，發(fā)現(xiàn)其應(yīng)圖與單抗5C5的反應(yīng)獲得了一個(gè)新的雜交瘤均與還原條件下3D5細(xì)胞9ZKD、52Kn(兩條)、40、了力1一

腹水和抗CD3單抗腹水與它們則沒(méi)有反應(yīng)(圖2)。另外單抗5C5一G.和單抗55c與3D5細(xì)胞膜蛋白的免疫沉淀物在還原條件下經(jīng)SDS-PAGE和放射自顯影亦均顯示9ZKD和52【D兩條蛋白帶(圖3)。這些結(jié)果表明，單抗5CS一引與單抗55c識(shí)別人活化B細(xì)胞株3D5細(xì)胞膜上相同的分子。一92KD一SZKD奮圖3，仍細(xì)胞膜蛋白免疫沉淀放射性自顯影F19.5AutoradiograPhyoftheProtelnson五DSeollmembraneimmunoPreeipitatedbyMeAb5C5orMeAb5C5一G一12，I一laboled5D5eelLmembraneProteinswerepreeiPitatedbyMeAb5C5(a一redueing，b一nonredueing)orMeAb5C5一6，(e一rodueing，d一nonredueing).ThePreeiPitatedProleinswere5ePeratedonSDS一PA6EandautoradiograPhiealtyanatyzed呼4.2單抗5c5和單抗5C5一G.識(shí)別的分化抗原表達(dá)于活化B細(xì)胞表面間接免疫熒光染色流式細(xì)胞儀分析顯示(表3)，正常人外周血B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞表面均不表達(dá)單抗5C5和單抗5C5一G:識(shí)別的分化抗原(稱為5C5)
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：1995
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：2694583