【摘要】：嚴(yán)重急性呼吸道綜合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)又稱(chēng)“非典型性肺炎”,或“非典”,主要表現(xiàn)為肺炎及漸進(jìn)性呼吸衰竭,死亡率為10%左右。它于2002年11月在中國(guó)廣東省首先爆發(fā),然后迅疾傳播至全球32個(gè)國(guó)家及地區(qū),其病原為一種新的冠狀病毒(SARS associated coronavirus,SARS-CoV)。目前尚無(wú)特效藥物用于SARS治療,正在研究的各種抗病毒方法包括:用模擬受體分子或病毒的受體結(jié)合蛋白封閉病毒受體相互作用、用小肽分子抑制病毒與細(xì)胞膜間的融合、用特定中和表位研制亞單位疫苗等。SARS-CoV刺突蛋白S1是與病毒主要受體血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)相結(jié)合的病毒蛋白,其受體結(jié)合功能區(qū)包括在第318-510個(gè)氨基酸殘基間的193個(gè)氨基酸片段內(nèi),該片段同時(shí)包含多個(gè)中和表位。本研究通過(guò)克隆表達(dá)SARS-CoV的S1蛋白受體結(jié)合區(qū),為SARS-CoV受體ACE2功能區(qū)鑒定提供手段;同時(shí),用所表達(dá)的S1蛋白為靶蛋白,從噬菌體展示隨機(jī)肽庫(kù)中篩選特異性結(jié)合多肽,為病毒受體及抗原抗體相互研究及抗病毒研究提供理論依據(jù)。 本論文將S144-643的基因片段(nt430-nt1929)克隆入表達(dá)質(zhì)粒pET-28b中,在大腸桿菌中原核表達(dá)了該段S1蛋白。S1蛋白以組氨酸標(biāo)簽標(biāo)記,蛋白分子量為50KD左右,以包涵體形式存在于細(xì)菌中。Western blot證明,S144-643可以與SARS康復(fù)病人的陽(yáng)性血清發(fā)生特異性反應(yīng),免疫新西蘭大白兔可以誘發(fā)產(chǎn)生較高水平的特異性抗體,因而證明原核表達(dá)的S144-643具有良好的免疫原性。同時(shí)Western blot證實(shí),S144-643蛋白能與病毒受體ACE2結(jié)合。結(jié)合楊國(guó)良ACE2的有關(guān)研究材料,證實(shí)ACE2 N端的335個(gè)氨基酸與SARS-CoV S1的結(jié)合相關(guān)。 經(jīng)過(guò)His.Bind試劑盒純化的S144-643蛋白作為靶蛋白,從十二肽庫(kù)中篩選與其特異性結(jié)合的多肽。經(jīng)過(guò)3輪篩選,并經(jīng)過(guò)ELISA和Dot-blot分析,得到10個(gè)陽(yáng)性噬菌體克隆。序列分析結(jié)果顯示,這10個(gè)陽(yáng)性噬菌體克隆多肽序列中具有明顯的保守序列。假病毒中和試驗(yàn)初步證實(shí),其中兩個(gè)噬菌體具有病毒中和活性。
【圖文】：

圖1SARS冠狀病毒的分類(lèi)示意圖g.1.ThedassineaUonskecthmaPofSARS.assoeiaetdeoor(Ksiazeketal.，2003)

SARS冠狀病毒結(jié)構(gòu)示意圖
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類(lèi)號(hào)】：R373

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 楊新艷,徐軍,鐘南山;SARS冠狀病毒的分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).呼吸系統(tǒng)分冊(cè);2005年01期

2 郭堯君;SDS電泳技術(shù)的實(shí)驗(yàn)考慮及最新進(jìn)展[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;1991年01期

3 劉剛,陳惠鵬;冠狀病毒感染細(xì)胞的受體結(jié)合機(jī)制[J];生物技術(shù)通訊;2003年03期

4 方宏清,陳惠鵬;冠狀病毒S蛋白的結(jié)構(gòu)和功能[J];生物技術(shù)通訊;2003年03期

5 孫琰,柳林,潘欣;SARS冠狀病毒S蛋白的功能性受體-ACE2[J];微生物學(xué)雜志;2004年04期

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本文編號(hào)：2690810