【摘要】：目的: 本實(shí)驗(yàn)旨在研究如何從昆明種小鼠的囊胚中分離出具有發(fā)育全能性 的胚胎干細(xì)胞,并分析其部分生物學(xué)特性。 方法:采用整胚培養(yǎng)法,通過(guò)將超排卵后孕 3.5 天的昆明種小鼠囊胚與由孕 13.5 天的小鼠胚胎制備的胚胎成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層共培養(yǎng),以高糖 DMEM 添加 15%胎牛血清、2mmol/lL-谷氨酰胺、0.1mmol/lβ—巰基乙醇,以及 1000u/ml 的 鼠白血病抑制因子(mLIF)和青霉素鈉、鏈霉素等為培養(yǎng)基,利用自制的玻璃 微針在解剖顯微鏡下機(jī)械分離增殖 2~3 天的內(nèi)細(xì)胞群(ICM),在 0.25%胰蛋白 酶—0.04%EDTA 混合消化液的液滴中消化 3~5min,然后再接種到新的飼養(yǎng)層上 培養(yǎng)。觀察記錄消化后細(xì)胞集落的生長(zhǎng)情況,對(duì) ES 細(xì)胞樣集落繼續(xù)消化傳代培 養(yǎng),并行鈣-鈷法的堿性磷酸酶染色(AKP)檢測(cè)。同時(shí)將同一天沖出的囊胚, 分成 7 盤接種在同一批制備的飼養(yǎng)層上(每盤 5 個(gè)囊胚),待其長(zhǎng)出 ICM 后,連 續(xù)每天檢測(cè) ICM 的 AKP 染色情況。觀察 ICM 的細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中的 AKP 活性 變化。 結(jié)果:獲得胚胎干細(xì)胞集落,并在后期培養(yǎng)中能分化成具有自動(dòng)節(jié)律性收縮 的心肌細(xì)胞。經(jīng)堿性磷酸酶(AKP)染色檢測(cè),發(fā)現(xiàn)昆明種小鼠囊胚的內(nèi)細(xì)胞群 細(xì)胞(ICM)和由其分離的 ES 細(xì)胞集落均顯示 AKP 強(qiáng)陽(yáng)性,說(shuō)明它們具有發(fā)育 全能性,具備干細(xì)胞的特征。同時(shí)用 AKP 染色檢測(cè)不同時(shí)間段生長(zhǎng)的 ICM,發(fā) 現(xiàn)增殖 2~5 日齡的 ICM 有較強(qiáng)的 AKP 表達(dá),而 7 日齡的 ICM 則開始分化,檢 測(cè)結(jié)果為陰性。 結(jié)論:①增殖 5 日齡前的 ICM 可用于分離 ES 細(xì)胞,7 日齡的 ICM 已經(jīng)分 化不能用于分離 ES 細(xì)胞②可以從昆明種小鼠囊胚的內(nèi)細(xì)胞群中分離出具有發(fā)育 全能性的 ES 細(xì)胞③ES 細(xì)胞在一定條件下可以被誘導(dǎo)分化為能自發(fā)跳動(dòng)的心肌 細(xì)胞。
【圖文】：

19.20所示):為強(qiáng)陽(yáng)性，，而飼葬層的鼠胚成纖維細(xì)胞則不著色

桑椎胚txlOn)孕3.5夭的小鼠胚胎小部分是�；张�，圖中可見其外包完整的透明帶，透明帶下方有10多個(gè)由受釉卵卵裂形成的卵裂球
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 尚克剛,胡新立;小鼠囊胚的不同遺傳背景對(duì)形成ES細(xì)胞集落的影響[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);1993年02期

2 孟國(guó)良,滕路,薛友紡,尚克剛;BALB/c小鼠胚胎干細(xì)胞系建立的方法學(xué)探討[J];遺傳學(xué)報(bào);2002年07期

3 劉蘭英,楊琨,朱振宇,劉玉川,余細(xì)勇,銀巍,湯建,馬澗泉,顧軍;胚胎干細(xì)胞體外分化為心肌細(xì)胞誘導(dǎo)因素的探討[J];中國(guó)病理生理雜志;2000年05期

本文編號(hào)：2688111