發(fā)布時間：2020-05-30 12:10

【摘要】：目的: 本實驗旨在研究如何從昆明種小鼠的囊胚中分離出具有發(fā)育全能性 的胚胎干細胞,并分析其部分生物學特性。 方法:采用整胚培養(yǎng)法,通過將超排卵后孕 3.5 天的昆明種小鼠囊胚與由孕 13.5 天的小鼠胚胎制備的胚胎成纖維細胞飼養(yǎng)層共培養(yǎng),以高糖 DMEM 添加 15%胎牛血清、2mmol/lL-谷氨酰胺、0.1mmol/lβ—巰基乙醇,以及 1000u/ml 的 鼠白血病抑制因子(mLIF)和青霉素鈉、鏈霉素等為培養(yǎng)基,利用自制的玻璃 微針在解剖顯微鏡下機械分離增殖 2~3 天的內(nèi)細胞群(ICM),在 0.25%胰蛋白 酶—0.04%EDTA 混合消化液的液滴中消化 3~5min,然后再接種到新的飼養(yǎng)層上 培養(yǎng)。觀察記錄消化后細胞集落的生長情況,對 ES 細胞樣集落繼續(xù)消化傳代培 養(yǎng),并行鈣-鈷法的堿性磷酸酶染色(AKP)檢測。同時將同一天沖出的囊胚, 分成 7 盤接種在同一批制備的飼養(yǎng)層上(每盤 5 個囊胚),待其長出 ICM 后,連 續(xù)每天檢測 ICM 的 AKP 染色情況。觀察 ICM 的細胞在培養(yǎng)過程中的 AKP 活性 變化。 結(jié)果:獲得胚胎干細胞集落,并在后期培養(yǎng)中能分化成具有自動節(jié)律性收縮 的心肌細胞。經(jīng)堿性磷酸酶(AKP)染色檢測,發(fā)現(xiàn)昆明種小鼠囊胚的內(nèi)細胞群 細胞(ICM)和由其分離的 ES 細胞集落均顯示 AKP 強陽性,說明它們具有發(fā)育 全能性,具備干細胞的特征。同時用 AKP 染色檢測不同時間段生長的 ICM,發(fā) 現(xiàn)增殖 2~5 日齡的 ICM 有較強的 AKP 表達,而 7 日齡的 ICM 則開始分化,檢 測結(jié)果為陰性。 結(jié)論:①增殖 5 日齡前的 ICM 可用于分離 ES 細胞,7 日齡的 ICM 已經(jīng)分 化不能用于分離 ES 細胞②可以從昆明種小鼠囊胚的內(nèi)細胞群中分離出具有發(fā)育 全能性的 ES 細胞③ES 細胞在一定條件下可以被誘導(dǎo)分化為能自發(fā)跳動的心肌 細胞。
【圖文】：

19.20所示):為強陽性，，而飼葬層的鼠胚成纖維細胞則不著色

桑椎胚txlOn)孕3.5夭的小鼠胚胎小部分是�；张�，圖中可見其外包完整的透明帶，透明帶下方有10多個由受釉卵卵裂形成的卵裂球
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2004
【分類號】：R329

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

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本文編號：2688111