發(fā)布時(shí)間：2020-05-30 10:42

【摘要】： 噬菌體作為感染細(xì)菌的病毒,在自然界中廣泛存在。溶原性噬菌體感染敏感菌后,可以出現(xiàn)兩種反應(yīng):一種是裂解反應(yīng),另一種是溶原性反應(yīng)。溶原性噬菌體的基因組可整合到宿主染色體DNA上,成為“前噬菌體”(prophage)。研究表明,自然界中的細(xì)菌攜帶“前噬菌體”是一種普遍現(xiàn)象。前噬菌體在與宿主菌基因組不斷地整合、轉(zhuǎn)座和切離的過程中,改變著宿主菌及噬菌體自身的基因組構(gòu)成。如由噬菌體介導(dǎo)的細(xì)菌毒力基因的轉(zhuǎn)移、細(xì)菌耐藥基因的傳遞等導(dǎo)致了病原菌基因表型的多態(tài)性,這在醫(yī)學(xué)與遺傳學(xué)中是一個(gè)日益嚴(yán)峻的重要問題。因此研究噬菌體在細(xì)菌染色體中的整合位點(diǎn)及整合與切離的機(jī)制極為重要,它是闡明自然界中不同物種間的基因流以及由此帶來(lái)的生物多樣性等生命科學(xué)領(lǐng)域中的重大課題的基礎(chǔ)。就銅綠假單胞菌噬菌體而言,僅在噬菌體D3及Pf1中鑒定出整合酶,由這些整合酶催化的噬菌體基因組整合到銅綠假單胞菌染色體上的確切機(jī)制及位點(diǎn)尚未闡明。2000年,Stover CK等61位科學(xué)家完成了銅綠假單胞菌PAO1菌株全基因組的測(cè)序及注釋工作。該基因組(NC 002516)全序列及相關(guān)注釋的公布,為研究銅綠假單胞菌噬菌體在宿主菌中的整合位點(diǎn)及其整合機(jī)制奠定了良好的基礎(chǔ)。本文以溶原性噬菌體PaP3為研究對(duì)象,首先研究其溶原化條件和生物學(xué)特性,然后對(duì)其整合位點(diǎn)進(jìn)行鑒定,為深入研究整合機(jī)制和因此而介導(dǎo)的生物多樣性奠定基礎(chǔ)。研究?jī)?nèi)容和結(jié)果主要包括以下幾個(gè)方面。 1.銅綠假單胞菌噬菌體PaP3溶原化條件的研究。 (1)銅綠假單胞菌噬菌體PaP3溶原性的鑒定:利用PstⅠ對(duì)感染PaP3的銅綠假單胞菌溶源性基因組進(jìn)行酶切,產(chǎn)生了大于45kb的大片段,這個(gè)45kb的片段包括了PaP3全基因組,在兩端含有部分宿主菌基因組序列,說明噬菌體全基因組已經(jīng)整合至宿主菌的染色體上,從而在基因水平上證明了PaP3為溶原性噬菌體。 (2)噬菌體PaP3最佳溶原化培養(yǎng)條件的確定:根據(jù)溶原性細(xì)菌基因組DNA的酶切鑒定結(jié)果,確定噬菌體PaP3的最佳溶原化培養(yǎng)條件為:37℃時(shí),在NZYM培養(yǎng)基中培養(yǎng)銅綠假單胞菌PA3 10h后,以1:20(噬菌體數(shù)目:宿主菌數(shù)目)的比例加入噬菌
【圖文】：

圖 1 溶原性細(xì)菌基因組的 PstⅠ酶切圖未感染 PaP3 的銅綠假單胞菌 PA3 基因組未感染 PaP3 的銅綠假單胞菌 PA3 基因組被感染 PaP3 的銅綠假單胞菌 PA3 基因組感染 PaP3 的銅綠假單胞菌 PA3 基因組被 PPaP3 基因組PaP3 基因組被 PstⅠ酶切λDNA/Hind Ⅲ Marker,分子量分別為 27.5kb,9.4kb, 6.5kb, 4.3kb, 2.3kb, 2.0kbλDNA 45kb 的片段包括了 PaP3 全基因組，，在全基因組已經(jīng)整合至宿主菌的染色體上aP3 為溶原性噬菌體(見圖 2)。

lane 1：未感染 PaP3 的銅綠假單胞菌 PA3 基因組lane 2：未感染 PaP3 的銅綠假單胞菌 PA3 基因組被 PstⅠ酶切l(wèi)ane 3：感染 PaP3 的銅綠假單胞菌 PA3 基因組lane 4：感染 PaP3 的銅綠假單胞菌 PA3 基因組被 PstⅠ酶切l(wèi)ane 5：PaP3 基因組lane 6：PaP3 基因組被 PstⅠ酶切l(wèi)ane 7：λDNA/Hind Ⅲ Marker,分子量分別為 27.5kb, 23.1kb,9.4kb, 6.5kb, 4.3kb, 2.3kb, 2.0kblane 8：λDNA理的解釋是這個(gè) 45kb 的片段包括了 PaP3 全基因組，在兩端含有部分列，說明噬菌體全基因組已經(jīng)整合至宿主菌的染色體上，可確定該菌為因水平上證明 PaP3 為溶原性噬菌體(見圖 2)。
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R378

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2688014