發(fā)布時間：2020-05-26 17:49

【摘要】： 急性移植物抗宿主病(aGVHD)是異基因骨髓移植的主要并發(fā)癥，嚴重影響患者的生存率。目前常用的免疫抑制療法如CsA+MTX毒副作用大，易引起嚴重感染及肝腎中毒。而單克隆抗體雖可抑制免疫排斥，但因降低移植物抗白血病(GVL)效應而易導致骨髓移植失敗。因此，尋找一種新的毒副作用小且較溫和的免疫抑制方法成為當今急需解決的課題之一。 研究表明高壓氧(hyperbaric oxide，HBO)作為一種溫和的免疫抑制方法既能抑制aGVHD又保留GVL效應，它可抑制細胞免疫功能，降低T淋巴細胞及其亞群數(shù)量，抑制IL-2的產生及其受體的表達，使T細胞對其反應性下降；抑制T細胞表面粘附分子LFA-1的表達，從而抑制T細胞活化及其對靶細胞的殺傷作用。它可延長異基因移植皮片存活時間，還可改善組織供氧，抗感染，增加受損組織血流量，所以對aGVHD的防治有明顯優(yōu)勢。本文的目的在于，在以往實驗的基礎上，觀察異基因骨髓移植小鼠，經HBO，CsA+MTX作用后，細胞中促進aGVHD的細胞因子IL-2，TNF-α及抑制aGVHD的細胞因子IL-4，IL-10的mRNA表達情況，探討HBO抗aGVHD的機理，為HBO的臨床應用提供實驗依據(jù)。 方法 一、動物模型復制 供鼠BALA／C(H-2~d)雌性，受鼠C57BL／6(H-2~b)雄性(由中國醫(yī)科大學動物部提供)，8-12周齡，體重20g左右。受鼠 C57BL/6在骨髓移植前24小時內在直線加速器內接受18O0cGY 全身照射，劑量率為ZooeGY/min。骨髓移植當天頸椎脫臼法處 死供鼠，在0℃下無菌取脾及骨髓，制成混合細胞懸液，經尾靜脈 輸給受鼠。 二、實驗動物分組與處理 受鼠受照射后隨即分成五組，A組:同基因移植組;B組:異基 因移植組;C組:csA+MTX組;D組:供鼠高壓氧處理組;E組: 供、受鼠高壓氧處理組。D組及E組供鼠于骨髓移植前3天起，連 續(xù)3天，每日一次，送人直徑48cm，深48cm的試驗用高壓氧艙 中，用99 .2%的氧氣沖洗該艙3次后，30分鐘內使艙內壓力達0. 25 MPa，并維持該壓力1 .5小時，減壓30分鐘后取出。E組受鼠于 骨髓移植后第一天起至第十天送人高壓氧艙中，條件同上。C組 受鼠骨髓移植后10天內，每日腹腔注射CsA(2.sm擴kg·d)，移 植后第1、3、5、9天腹腔同時注射M以(7m擴m，)。各組受鼠骨髓 移植后送人無菌室內飼養(yǎng)。 三、細胞因子基因表達的檢測 骨髓移植第11天處死各組受鼠，取出脾組織，提取總RNA， 用RT一PCR法檢測細胞因子IL一2，TNF一a，IL一4，IL- 1 omRNA水平的變化，所得數(shù)據(jù)用配對T檢驗進行統(tǒng)計學分析。 結果 一、一般狀態(tài) 骨髓移植以后觀察受鼠一般狀態(tài)，兩組經HBO處理小鼠及同 基因移植組一般狀態(tài)較好，毛色光澤，活潑，食欲好，脫毛，弓背等 aGvHD癥狀不明顯。異基因移植組(B組)小鼠一般狀態(tài)差、倦 怠、食欲不振、脫毛，弓背等aGVHD癥狀明顯。csA+M雙組(C 組)小鼠一般狀態(tài)不好，脫毛，弓背等aGVHD癥狀不明顯，但有腹 瀉現(xiàn)象發(fā)生。 二、移植后n天各組小鼠生存率比較 HBO組(D組:9/l1;E組:9/10)及同基因移植組(A組:9/ 10)生存率明顯高于異基因移植組(B組:8/17)及CsA+MTX組 (C組:9/l9)。A、D、E三組之間比較，生存率無明顯差別。B、C 兩組之間生存率無明顯差別。 三、CsA+M儀組TNF一a及IL一2的mRNA相對含量顯著 低于異基因組(p0.05)，而IL一4和IL一10的mRNA相對含量 則與異基因組無明顯差別(p0.05)。D組及E組TNF一。和IL 一2的mRNA相對含量顯著低于異基因組(p0 .05)，而又顯著 高于CsA+MTX組;IL一4和IL一10的mRNA相對含量顯著高于 異基因組及CsA+MTX組(p0.05)。E組，I’NF一amRNA相對 含量顯著低于D組(p 0.05)，IL一2、IL一4和IL一10的mRNA 在兩組之間變化不明顯(p0.05)。 討論 aGvHD發(fā)病機制尚未完全明了，一般認為主要和次要組織相 容性抗原復合物的差異，是移植排斥的分子基礎。移植物中的成 熟T細胞是導致aGvHD的免疫活性細胞�！凹毎蜃语L暴學說” 指出，分泌失調的細胞因子是引起aGVHD時組織損傷的主要介 質。Thl細胞分泌的細胞因子IL一2，TNF一a促進aGVHD的發(fā) 生，ThZ細胞分泌的細胞因子幾一4，IL一10則抑制aGVHD的發(fā) 生。aGVHD時靶器官損害的共同通路被認為是細胞因子網絡的 破壞。本實驗研究結果證明: 1.HBO可明顯抑制aGVHD，提高aGVHD小鼠的生存率。 2.HBO抑制aGVHD的機制是通過減少TNF一amRNA及IL 一ZmRNA的形成，.導致促進aGVHD的發(fā)生的細胞因子IL一2， TNF一a在血液中濃度降低;同時增加抑制aGvHD發(fā)生的細胞因 子IL一4及IL一10的mRNA的量，使IL一4及IL一10在血液中濃 度升高。 3.HBO的毒副作用小，具有溫和的抗aGVHD的作用，與 CsA 十MTX相比，可明顯提高小鼠的生存率，所以比CsA+M以更適 用于臨床應用。
【學位授予單位】：中國醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2003
【分類號】：R392

【參考文獻】

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本文編號：2682193