【摘要】： 目的：建立分泌抗海洋褐胞藻、卵圓褐胞藻、赤潮異彎藻、具齒原甲藻、尖刺擬菱形藻等五種藻的高特異性、高親和性單克隆抗體雜交瘤細胞株。若該類細胞株所分泌的單克隆抗體結(jié)合特定藻抗原，則可利用此類單克隆抗體鑒別此五種不同的藻，從而為赤潮藻的檢測、監(jiān)測和防治提供有效的工具。 方法：將五種藻混合免疫Balb/c小鼠，加強免疫三次后，取血清效價高的小鼠脾臟細胞按一定的比例與SP2/0骨髓瘤細胞混合，加入PEG4000使兩者融合。用HAT，HT等選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)雜交瘤細胞，然后用間接血凝初步篩選出有抗體分泌的細胞克隆。進一步采用間接ELISA法等，用海洋褐胞藻等五種赤潮藻細胞包被96孔酶標板篩選分泌特異性單克隆抗體的克隆。擴增陽性克隆并凍存，制備腹水，測定腹水效價，用硫酸氨，protein-A等法純化腹水型抗體。 結(jié)果：所得雜交瘤細胞融合率為37.5％。經(jīng)反相間接血凝、間接ELISA法等篩選到能分泌抗藻單克隆抗體的細胞株，其中9AD2B2對海洋褐胞藻和卵圓褐胞藻的特異性高；15CA7對赤潮異彎藻和尖刺擬菱形藻的特異性高；23BG2和23BG9對赤潮異彎藻、具齒原甲藻與尖刺擬菱形藻的特異性高。而獲得的M18號雜交瘤細胞株分泌的單克隆抗體可與以上五種藻產(chǎn)生高效價的明顯交叉反應(yīng)，顯示此單抗可代替五種海洋藻的抗血清。在藻最佳包被濃度時，9AD2A8腹水對五種藻的效價均可達到1：3200，23BG9E11腹水五種藻的效價可達1：1280，，兩種腹水主要成分均為IgG1。 結(jié)論：利用雜交瘤技術(shù)能制備出分泌抗五種藻的單克隆抗體的細胞株。該類細胞株分泌的單克隆抗體可特異性地結(jié)合到五種藻細胞上，這意味著可用此類單克隆抗體鑒定、檢測這五種赤潮藻。
【圖文】：

分別加入ZO0uL用5%BS龍PBS液以1:50稀釋的M18號上清液、正常小鼠血清，輕輕吹打使細胞懸起，在室溫下緩慢旋轉(zhuǎn)溫育1h。(6)looorPm離心s而n，用soouLS%BSA一pBs液洗滌兩次。(7)分別加入ZOOuL用5%BSA一PBS液以1:50稀釋的F工TC標記的羊抗小鼠抗體。吹打使細胞懸起，在室溫下旋轉(zhuǎn)溫育lh。(s)loootPm離心s而n，用soouLS%Bs午PBs液洗滌兩次。(9)用10OuLPBS液懸起細胞，滴加15uL于載玻片，在熒光顯微鏡下觀察。4.5.3免疫熒光結(jié)果在綠色激發(fā)光下，F(xiàn)ITC標記的海洋褐胞藻呈現(xiàn)紅色(見圖6)，而在FITC的激發(fā)光一藍光激發(fā)下，海洋褐胞藻外觀為黃綠色(見圖7);正常血清作陰性對照時，用藍光激發(fā)藻細胞，細胞表面呈現(xiàn)褐色，此現(xiàn)象說明可能細胞表面有少量非特異結(jié)合的RTC(見圖8)。海洋褐胞藻曰TC標記綠色激發(fā)光對照(400火)海洋褐胞藻曰Tc標記煒漁激發(fā)
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2003
【分類號】：R392

【參考文獻】

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本文編號：2678876