本文關(guān)鍵詞：中國對蝦肌肉蛋白激發(fā)小鼠過敏反應(yīng)及其機(jī)理研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：對蝦等水產(chǎn)品食用蛋白的致敏性對食用者的安全健康存在著潛在的威脅,而致敏性的高低主要取決于食用蛋白中過敏原的種類以及含量。對于易過敏人群而言,食用對蝦等富含過敏原的食物易引發(fā)全身性過敏反應(yīng),出現(xiàn)腸道黏膜過敏癥狀以及體內(nèi)一些生理指標(biāo)的變化。鑒于此,本研究擬以具有較高經(jīng)濟(jì)價值的特色物種中國對蝦為對象,建立腹腔注射該蝦肌肉蛋白的ICR小鼠過敏模型,結(jié)合間接ELISA測定小鼠血清中過敏原特異性IGE抗體水平以驗證過敏模型的成功建立,通過HE/甲苯胺藍(lán)染色以及免疫組化等手段探討該蝦肌肉蛋白引發(fā)小鼠腸道黏膜免疫的機(jī)理,最后通過測定小鼠相關(guān)臟器比重、抗氧化酶活性以及過敏指示酶的變化,表明了機(jī)體內(nèi)發(fā)生過敏的過程與一些生理指標(biāo)變化的相關(guān)性。本研究旨在為中國對蝦的攝入性過敏及體內(nèi)相關(guān)的免疫調(diào)控提供相關(guān)理論依據(jù),同時對于臨床評估中國對蝦過敏原的潛在致敏性具有一定的實際參考意義。主要研究結(jié)果如下： 1、采用腹腔免疫中國對蝦肌肉蛋白方法,建立針對該蝦蛋白過敏的ICR小鼠模型。通過SDS-PAGE電泳和AlphaView SA3.4.0電泳圖像分析軟件分析,初步推測了中國對蝦肌肉蛋白中可能含有的過敏原種類；建立小鼠過敏模型之后,采用間接ELISA方法檢測小鼠血清中過敏原特異性IgE水平在激發(fā)期不同時間點的變化,并通過各劑量組OD值和對照組OD值的橫向比較,結(jié)果大多為2.1倍以上,證明該模型已經(jīng)成功建立,可用于后續(xù)實驗研究。 2、采用各染色方法及免疫組化方法探討中國對蝦肌肉蛋白引發(fā)小鼠腸道黏膜免疫的機(jī)理。通過HE染色對小腸腸道形態(tài)學(xué)觀察初步證明了蝦蛋白致敏組小鼠腸道發(fā)生炎癥且導(dǎo)致上皮損傷；對小腸肥大細(xì)胞進(jìn)行甲苯胺藍(lán)染色發(fā)現(xiàn),蝦蛋白致敏組小鼠腸道肥大細(xì)胞發(fā)生了嚴(yán)重的脫顆�，F(xiàn)象,細(xì)胞完整率顯著降低；免疫組化檢測小腸中相關(guān)T細(xì)胞(CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞)以及IgA+漿細(xì)胞的數(shù)量,結(jié)果顯示該蝦蛋白致敏個體內(nèi)小腸內(nèi)這些細(xì)胞陽性率顯著高于對照組；提示蝦肌肉蛋白引發(fā)腸道黏膜免疫反應(yīng)是通過IgE介導(dǎo)的速發(fā)型過敏反應(yīng)以及T淋巴細(xì)胞依賴性延遲型過敏反應(yīng)協(xié)同作用,并伴有B淋巴細(xì)胞向IgA+漿細(xì)胞持續(xù)分化來實現(xiàn)。 3、研究中國對蝦肌肉蛋白引發(fā)小鼠體內(nèi)相關(guān)臟器比重及酶的變化。采用酶活試劑盒測定抗氧化酶(SOD、POD、CAT、GSH-Px、 GST)和NOS/iNOS活性；使用雙抗夾心ELISA方法檢測PLA2的濃度；對Ca2+-ATPase mRNA相對表達(dá)量的檢測采用RT-PCR方法。對各蝦蛋白劑量組和對照組小鼠肝臟、腎臟、脾臟比重比較發(fā)現(xiàn),蝦蛋白致敏組小鼠肝、腎發(fā)生了不同程度的萎縮,且隨著注射劑量加大而萎縮程度越嚴(yán)重,而脾臟則發(fā)生腫大,且隨著注射劑量加大而腫大程度越嚴(yán)重；通過測定小鼠肝、腎、脾及血清中這幾種抗氧化酶的活性發(fā)現(xiàn),蝦蛋白致敏組個體內(nèi)這些酶的活性明顯升高；而測定小鼠體內(nèi)肝、腎、脾和/或血清中三種過敏特征酶的變化發(fā)現(xiàn),蝦蛋白致敏組個體內(nèi)肝、腎、脾及血清中NOS/iNOS活性明顯提高、PLA2濃度顯著增加,而肝臟、腎臟、脾臟內(nèi)Ca2+-ATPase mRNA相對表達(dá)量下降；提示過敏的發(fā)生過程與機(jī)體內(nèi)臟器比重、抗氧化酶的活性、NOS/iNOS活性、PLA2濃度以及Ca2+-ATPase mRNA相對表達(dá)量均有一定的相關(guān)性,這些生理指標(biāo)可通過與機(jī)體內(nèi)其他相關(guān)免疫細(xì)胞和細(xì)胞因子的相互作用,啟動機(jī)體內(nèi)相關(guān)的免疫應(yīng)答。
【關(guān)鍵詞】：中國對蝦 肌肉蛋白 ICR小鼠 過敏反應(yīng) 黏膜免疫 酶
【學(xué)位授予單位】：浙江工商大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要3-6
• ABSTRACT6-14
• 第一章 文章綜述14-32
• 1 食物過敏反應(yīng)和作用機(jī)制14-26
• 1.1 食物過敏和食物過敏原14-17
• 1.1.1 食物過敏14-15
• 1.1.2 食物過敏的流行病學(xué)15-16
• 1.1.3 食物過敏原16-17
• 1.2 食物過敏的作用機(jī)制17-22
• 1.2.1 食物過敏的一般致敏機(jī)制18-19
• 1.2.2 食物過敏的分子致敏機(jī)制以及免疫調(diào)控19-22
• 1.3 動物模型22-24
• 1.4 食物過敏原的檢測技術(shù)24-26
• 1.4.1 體內(nèi)檢測技術(shù)24
• 1.4.2 體外檢測技術(shù)24-25
• 1.4.3 食物過敏原檢測技術(shù)的發(fā)展前景25-26
• 2 甲殼類水產(chǎn)過敏原的種類及其研究進(jìn)展26-30
• 2.1 甲殼類過敏原的種類26-29
• 2.1.1 原肌球蛋白(TM)27
• 2.1.2 精氨酸激酶(AK)27
• 2.1.3 肌球蛋白輕鏈(MLC)27-28
• 2.1.4 肌鈣結(jié)合蛋白(SCP)28
• 2.1.5 血藍(lán)蛋白亞基(HCS)28-29
• 2.1.6 磷酸丙糖異構(gòu)酶蛋白(TPI)29
• 2.2 國外研究進(jìn)展29-30
• 2.3 國內(nèi)研究進(jìn)展30
• 3 本研究的目的、內(nèi)容和意義30-32
• 3.1 研究的目的及意義30-31
• 3.2 研究的技術(shù)路線31-32
• 第二章 中國對蝦蛋白制備以及對ICR小鼠過敏模型的建立32-44
• 1 前言32
• 2 實驗材料與方法32-40
• 2.1 實驗對象32-33
• 2.2 主要試劑33
• 2.3 主要儀器設(shè)備33-34
• 2.4 實驗方法34-40
• 2.4.1 蝦蛋白浸液的制備34-36
• 2.4.1.1 蛋白質(zhì)提取34
• 2.4.1.2 蛋白含量測定34-36
• 2.4.2 蛋白SDS-PAGE電泳36-38
• 2.4.2.1 相關(guān)溶液配置36-37
• 2.4.2.2 SDS-PAGE凝膠配制37
• 2.4.2.3 SDS-PAGE蛋白樣品的制備37
• 2.4.2.4 SDS-PAGE電泳步驟37
• 2.4.2.5 染色、脫色37-38
• 2.4.2.6 圖像的掃描與分析38
• 2.4.3 蝦蛋白ICR小鼠過敏模型的建立38-40
• 2.4.3.1 ICR小鼠分組及喂養(yǎng)38
• 2.4.3.2 免疫方案38
• 2.4.3.3 小鼠血清中特異性IgE的測定38-40
• 3 結(jié)果與分析40-42
• 3.1 蛋白的SDS-PAGE分析40
• 3.2 小鼠血清中特異性sIgE的檢測結(jié)果40-42
• 4 討論42-43
• 5 本章小結(jié)43-44
• 第三章 中國對蝦蛋白誘導(dǎo)ICR小鼠腸道黏膜過敏反應(yīng)的機(jī)制研究44-55
• 1 前言44-45
• 2 實驗材料與方法45-48
• 2.1 實驗對象45
• 2.2 主要試劑45
• 2.3 主要儀器設(shè)備45-46
• 2.4 實驗方法46-48
• 2.4.1 取材及標(biāo)本處理46
• 2.4.2 小鼠腸道形態(tài)學(xué)觀察46-47
• 2.4.3 小腸肥大細(xì)胞完整率47
• 2.4.4 小鼠小腸絨毛相關(guān)T細(xì)胞和固有層漿細(xì)胞檢測47-48
• 3 結(jié)果與分析48-52
• 3.1 小鼠腸道的形態(tài)學(xué)觀察48-49
• 3.2 小腸肥大細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察以及完整率49-50
• 3.3 小鼠小腸絨毛相關(guān)T細(xì)胞及固有層IgA~+漿細(xì)胞檢測50-52
• 3.3.1 小腸絨毛T細(xì)胞及固有層漿細(xì)胞觀察50-52
• 3.3.2 陽性T細(xì)胞及IgA~+漿細(xì)胞計數(shù)和統(tǒng)計學(xué)處理52
• 4 討論52-54
• 5 本章小結(jié)54-55
• 第四章 中國對蝦蛋白引發(fā)ICR小鼠體內(nèi)臟器比重和相關(guān)酶的變化55-72
• 1 前言55-56
• 2 實驗材料與方法56-61
• 2.1 實驗對象56
• 2.2 主要試劑56
• 2.3 主要儀器設(shè)備56-57
• 2.4 實驗方法57-61
• 2.4.1 取材及樣本處理57
• 2.4.2 小鼠體內(nèi)不同臟器比重的測定57
• 2.4.3 小鼠體內(nèi)不同組織及血清中相關(guān)抗氧化酶的測定57-58
• 2.4.3.1 組織和血清中SOD、POD、CAT的活性測定57-58
• 2.4.3.2 組織和血清中GSH-Px、GST的活性測定58
• 2.4.4 小鼠體內(nèi)不同組織及血清中過敏特征酶的測定58-61
• 2.4.4.1 組織和血清中NOS/iNOS的活性測定58
• 2.4.4.2 組織和血清中PLA_2的濃度測定58-59
• 2.4.4.3 組織中Ca~(2+)-ATPase相對表達(dá)量測定59-61
• 3 結(jié)果與分析61-69
• 3.1 小鼠體內(nèi)不同組織的臟器指數(shù)比較61-62
• 3.2 小鼠體內(nèi)不同組織及血清中相關(guān)抗氧化酶的活性變化62-65
• 3.2.1 組織和血清中SOD、POD、CAT的活性變化62-64
• 3.2.2 組織和血清中GSH-Px、GST的活性變化64-65
• 3.3 小鼠體內(nèi)不同組織和血清中過敏特征酶變化65-69
• 3.3.1 組織和血清中NOS/iNOS的活性變化65-66
• 3.3.2 組織和血清中PLA_2的濃度變化66-67
• 3.3.3 組織中Ca~(2+)-ATPase相對表達(dá)量變化67-69
• 4 討論69-70
• 5 本章小結(jié)70-72
• 第五章 總結(jié)論、創(chuàng)新點及研究展望72-75
• 1 總結(jié)論72-73
• 2 創(chuàng)新點73
• 3 研究展望73-75
• 參考文獻(xiàn)75-83
• 附錄 縮略詞中英文對照表83-85
• 碩士期間完成的論文85-86
• 致謝86-87

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：中國對蝦肌肉蛋白激發(fā)小鼠過敏反應(yīng)及其機(jī)理研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：266513