本文關(guān)鍵詞：人呼吸道合胞病毒臨床分離株的生物學(xué)特性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus, RSV)是引起嬰幼兒急性下呼吸道感染的重要病原體之一,同時也是造成兒童、老齡人以及免疫能力低下的病人發(fā)病甚至死亡的主要原因。預(yù)防RSV最有效的方法就是接種疫苗,但到目前為止仍未見安全有效的RSV疫苗問世,因此,對RSV的流行趨勢、分離純化、培養(yǎng)特性等相關(guān)知識的研究為進(jìn)一步研發(fā)RSV疫苗提供了重要的參考依據(jù)。本論文的實(shí)驗(yàn)研究工作主要包括三個方面：(1)臨床樣本的Vero細(xì)胞分離培養(yǎng)物中的病毒檢測；(2)RSV分離株的鑒定及分型；(3)RSV分離株的培養(yǎng)特性研究。(1)臨床樣本的Vero細(xì)胞分離培養(yǎng)物中的病毒檢測本實(shí)驗(yàn)將從48份兒童痰樣中篩選到的11份能引起Vero細(xì)胞發(fā)生合胞現(xiàn)象的分離培養(yǎng)物進(jìn)行幾種常見的呼吸道病毒檢測,結(jié)果表明11份培養(yǎng)物中,RSV有5份,MuV有7份,PIV2型病毒疑似有4份,PIV3型病毒有2份,AdV有10份,MeV、PIV1型和RV病毒沒有。同時發(fā)現(xiàn)只有培養(yǎng)物QY-33是相對單一的RSV感染,其他均為兩種或兩種以上能引起Vero細(xì)胞發(fā)生合胞現(xiàn)象的常見呼吸道病毒的混合感染。(2)RSV分離株鑒定及分型將唯一一株相對單一RSV感染的分離培養(yǎng)物QY-33進(jìn)行噬斑純化,得到一株RSV分離株QY-33,并對其進(jìn)行鑒定及測序比對,確定此分離株為RSV病毒；然后經(jīng)巢式PCR擴(kuò)增出此分離株的G蛋白基因,通過測序比對、系統(tǒng)進(jìn)化樹分析,結(jié)果表明此分離株為RSV GAl亞型。(3)RSV分離株的培養(yǎng)特性研究初步探討RSV分離株QY-33的相關(guān)生物學(xué)培養(yǎng)特性：測定RSV感染不同細(xì)胞的病毒滴度,發(fā)現(xiàn)RSV對A549細(xì)胞最敏感；培養(yǎng)過程中分別測定細(xì)胞內(nèi)和培養(yǎng)上清中的RSV病毒滴度,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞病變達(dá)90%以上時RSV主要存在于培養(yǎng)上清中；測定用不同溫度培養(yǎng)的RSV的病毒滴度,發(fā)現(xiàn)RSV的最適培養(yǎng)溫度是37℃,32℃也行；初步嘗試?yán)梦⑤d體技術(shù)培養(yǎng)Vero細(xì)胞制備RSV病毒,效果較為理想。本論文從兒童痰樣中篩選得到一株RSV分離株QY-33,對其進(jìn)行分型分析,研究其生長培養(yǎng)特性,并初步建立了生物反應(yīng)器——微載體培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)Vero細(xì)胞制備RSV病毒的工藝,為進(jìn)一步大規(guī)�；囵B(yǎng)RSV病毒及疫苗研發(fā)奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：呼吸道合胞病毒 分離株 微載體 培養(yǎng)特性
【學(xué)位授予單位】：昆明理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R373.14
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-15
• 縮略語索引15-16
• 第一章 緒論16-25
• 1.1 呼吸道合胞病毒基因組結(jié)構(gòu)特征16-17
• 1.2 呼吸道合胞病毒感染的臨床癥狀17
• 1.3 呼吸道合胞病毒的流行情況17-19
• 1.4 呼吸道合胞病毒的藥物治療以及存在的問題19-20
• 1.5 呼吸道合胞病毒預(yù)防疫苗研究進(jìn)展及存在的問題20-24
• 1.6 本論文研究目的及意義24-25
• 第二章 臨床樣本的Vero細(xì)胞分離培養(yǎng)物中的病毒檢測25-46
• 2.1 材料與方法25-35
• 2.1.1 材料25
• 2.1.2 主要試劑及藥品25-26
• 2.1.3 溶液配制26-29
• 2.1.4 主要儀器29-30
• 2.1.5 方法30-35
• 2.2 結(jié)果35-43
• 2.2.1 臨床樣本的細(xì)胞分離培養(yǎng)物中病毒的增殖35-37
• 2.2.2 培養(yǎng)物的初步鑒定37-42
• 2.2.3 培養(yǎng)物病毒類型總結(jié)42-43
• 2.3 討論43-44
• 2.3.1 培養(yǎng)物中病毒的增殖與鑒定43-44
• 2.3.2 培養(yǎng)物中的病毒感染情況分析44
• 2.4 本章小結(jié)44-46
• 第三章 RSV分離株QY-33的鑒定與分型46-62
• 3.1 材料與方法46-53
• 3.1.1 材料46
• 3.1.2 主要試劑和藥品46-47
• 3.1.3 溶液配制47-48
• 3.1.4 主要儀器48-49
• 3.1.5 方法49-53
• 3.2 結(jié)果53-59
• 3.2.1 臨床樣本培養(yǎng)物QY-33挑單斑純化RSV病毒53-54
• 3.2.2 QY-33F基因片段的鑒定及測序54-56
• 3.2.3 QY-33G蛋白基因擴(kuò)增、測序比對及系統(tǒng)進(jìn)化樹分析56-59
• 3.3 討論59-61
• 3.3.1 RSV分離株QY-33的分離與鑒定59-60
• 3.3.2 RSV的進(jìn)化60
• 3.3.3 RSV分離株QY-33 G蛋白基因序列測定與分析60-61
• 3.4 本章小結(jié)61-62
• 第四章 RSV分離株QY-33的培養(yǎng)特性62-77
• 4.1 材料與方法62-66
• 4.1.1 材料62
• 4.1.2 主要試劑和藥品62
• 4.1.3 溶液配制62-63
• 4.1.4 主要儀器63
• 4.1.5 方法63-66
• 4.2 結(jié)果66-73
• 4.2.1 RSV分離株QY-33對不同細(xì)胞的敏感性66-68
• 4.2.2 RSV分離株QY-33的分布情況68-69
• 4.2.3 溫度對RSV分離株QY-33增殖的影響69-70
• 4.2.4 微載體培養(yǎng)Vero細(xì)胞培養(yǎng)RSV分離株QY-3370-73
• 4.2.5 PEG—透析袋濃縮后病毒的損失檢測73
• 4.3 討論73-75
• 4.3.1 RSV對不同細(xì)胞的敏感性73-74
• 4.3.2 RSV的分布形式74
• 4.3.3 溫度對RSV增殖的影響74
• 4.3.4 RSV的微載體培養(yǎng)74-75
• 4.3.5 RSV的濃縮75
• 4.4 本章小結(jié)75-77
• 第五章 全文總結(jié)77-79
• 第六章 展望79-80
• 致謝80-81
• 參考文獻(xiàn)81-88
• 附錄A 攻讀碩士期間發(fā)表論文、專利及參與項(xiàng)目目錄88

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張文清,馬文煜,駱文靜,姜紹諄,胡艷冰,侯悅,張進(jìn),于碧云;PEG6000沉淀結(jié)合差速離心方法濃縮水中脊髓灰質(zhì)炎病毒[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2000年01期

2 白華;王剛;劉恩梅;陸彪;;呼吸道合胞病毒感染的藥物治療進(jìn)展[J];兒科藥學(xué)雜志;2008年03期

3 陳建江,陳彩鳳,楊華英;α1b-干擾素霧化吸入治療呼吸道合胞病毒性肺炎50例[J];廣東藥學(xué)院學(xué)報;2004年05期

4 高文娟;金玉;段招軍;;人腺病毒的研究進(jìn)展[J];病毒學(xué)報;2014年02期

5 何金生;付遠(yuǎn)輝;洪濤;;人呼吸道合胞病毒活疫苗研究進(jìn)展[J];中國科學(xué):生命科學(xué);2011年01期

6 賀英;薛倩;安艷娟;胡陳瑩;李姝槿;郝云霞;魏博欣;;人副流感病毒入侵宿主細(xì)胞的分子機(jī)制[J];河北科技師范學(xué)院學(xué)報;2012年04期

7 徐軍;胡云章;;呼吸道合胞病毒疫苗研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通訊;2007年02期

8 宋穎麗;井申榮;;呼吸道合胞病毒G蛋白研究進(jìn)展[J];中國生物制品學(xué)雜志;2008年06期

9 謝忠平;李華;龍潤?quán)l(xiāng);易紅昆;沈冬;李志強(qiáng);崔萍芳;蔣蕊鞠;;人呼吸道合胞病毒A_2株在不同細(xì)胞中的培養(yǎng)及其影響因素[J];中國生物制品學(xué)雜志;2009年06期

10 蔣文玲,羅憲玲;老年呼吸系統(tǒng)疾病患者呼吸道合胞病毒感染狀況[J];實(shí)用老年醫(yī)學(xué);2002年06期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 井申榮;微載體制備甲肝滅活疫苗的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2000年

  本文關(guān)鍵詞：人呼吸道合胞病毒臨床分離株的生物學(xué)特性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：266279