本文關(guān)鍵詞：CYLDa對(duì)血管新生作用的實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景：血管新生(Angiogenesis)是成人體內(nèi)血管形成的主要方式之一,它指的是在組織已有的血管床上,內(nèi)皮細(xì)胞以出芽的方式從小靜脈中遷移出來(lái)從而形成管狀新生血管的過(guò)程。這個(gè)過(guò)程不僅是眾多生理過(guò)程的重要基礎(chǔ),而且血管新生異常與眾多疾病密切相關(guān),如病理性瘢痕、風(fēng)濕性疾病、缺血性心臟病等,尤其腫瘤生長(zhǎng)與其內(nèi)部的血管新生具有密不可分的聯(lián)系。研究血管新生的機(jī)理對(duì)于治療上述血管新生相關(guān)疾病具有重要臨床意義。圓柱瘤病分子(Cylindromatosis, CYLD)對(duì)血管新生的作用及其機(jī)理還不清楚。CYLD是一種抑癌基因,該基因的突變可以導(dǎo)致人類圓柱瘤病。CYLD作為一種去泛素化酶,能夠通過(guò)抑制NFκB通路下調(diào)NFκB靶基因的表達(dá),從而對(duì)炎癥反應(yīng)等產(chǎn)生抑制作用。有研究報(bào)道采用RNAi技術(shù)下調(diào)CYLD的表達(dá)后,血管內(nèi)皮細(xì)胞(Vascular endothelial cells, VECs)遷移及血管新生均受到抑制。但CYLD在血管新生過(guò)程中的作用尚有如下問(wèn)題亟待解決：1. CYLD分為三個(gè)亞型(CYLDa、CYLDb、sCYLD),它們?cè)诮Y(jié)構(gòu)上存在差異,這提示我們各同工型的功能可能不同,但目前還沒(méi)有文獻(xiàn)對(duì)其具體亞型進(jìn)行研究；2. CYLD對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用是否與其去泛素化酶的活性有關(guān)有待驗(yàn)證。本課題將構(gòu)建CYLDa和CYLDamut(無(wú)去泛素化酶活性)腺病毒、CYLDa和CYLDamut轉(zhuǎn)基因小鼠,在細(xì)胞遷移、主動(dòng)脈環(huán)模型、腫瘤血管新生模型、Matrigel模型上,采用形態(tài)學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的方法,明確CYLDa在血管新生中的作用及是否與其去泛素化酶活性相關(guān)。實(shí)驗(yàn)?zāi)康模禾接慍YLDa過(guò)表達(dá)對(duì)體外VECs增殖、遷移及成管的作用,并在體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證CYLDa對(duì)血管新生的作用；同時(shí),加入CYLDamut組(不具備去泛素化酶活性,從而失去對(duì)NFκB通路的抑制作用),通過(guò)比較過(guò)表達(dá)CYLDa和過(guò)表達(dá)CYLDamut兩組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,從而探究CYLDa調(diào)控血管新生的作用及這個(gè)作用是否與其去泛素化酶活性相關(guān)。實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果：1)制備CYLDa和CYLDamut腺病毒,通過(guò)腺病毒感染的方法,使VECs過(guò)表達(dá)CYLDa及CYLDamut,采用CCK-8法和細(xì)胞劃痕損傷分析分別對(duì)VECs的增殖及遷移進(jìn)行檢測(cè),并在三維膠原中檢測(cè)感染腺病毒后的VECs管腔形成能力。2)分別制備CYLDa轉(zhuǎn)基因小鼠、CYLDamut轉(zhuǎn)基因小鼠及WT野生型小鼠的乳腺癌及肺癌模型,觀察三組小鼠的乳腺癌組織和肺癌組織中血管新生的情況,并對(duì)所取腫瘤組織進(jìn)行CD31的免疫組化染色,檢測(cè)血管新生的相對(duì)數(shù)量。另外,利用向三組小鼠皮下注射Matrigel的方法以及體外培養(yǎng)小鼠主動(dòng)脈環(huán)血管新生的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證CYLDa在體內(nèi)對(duì)血管新生的作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)論：1) CYLDa過(guò)表達(dá)具有抑制血管新生的作用；2) CYLDa過(guò)表達(dá)抑制血管新生與其去泛素化酶活性無(wú)關(guān)
【關(guān)鍵詞】：圓柱瘤病分子 血管內(nèi)皮細(xì)胞 血管新生 腫瘤
【學(xué)位授予單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R363
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-9
• 第一章 緒論9-26
• 1.1 血管新生的研究進(jìn)展9-18
• 1.1.1 血管新生的意義9-10
• 1.1.2 血管新生的過(guò)程10-11
• 1.1.3 調(diào)控血管新生的相關(guān)因子11-14
• 1.1.3.1 血管生成素11
• 1.1.3.2 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子11-12
• 1.1.3.3 堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子12
• 1.1.3.4 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子12-13
• 1.1.3.5 血小板反應(yīng)蛋白13
• 1.1.3.6 色素上皮衍生因子13-14
• 1.1.3.7 基質(zhì)金屬蛋白酶14
• 1.1.4 血管新生相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路14-18
• 1.1.4.1 NFκB通路15-16
• 1.1.4.2 Notch通路16-17
• 1.1.4.3 PI3K/AKT-mTOR通路17
• 1.1.4.4 Ras-Raf-MEK1/2-MAPK通路17-18
• 1.2 血管內(nèi)皮細(xì)胞18-19
• 1.2.1 血管內(nèi)皮細(xì)胞的生物學(xué)功能18
• 1.2.2 血管內(nèi)皮細(xì)胞的定向遷移18-19
• 1.2.3 血管管腔與血管內(nèi)皮細(xì)胞19
• 1.3 CYLD的研究進(jìn)展19-24
• 1.3.1 CYLD的分子結(jié)構(gòu)19-21
• 1.3.2 泛素-蛋白酶體介導(dǎo)的泛素化蛋白質(zhì)降解過(guò)程21
• 1.3.3 CYLD翻譯后的調(diào)控修飾21-23
• 1.3.4 CYLD的生物學(xué)功能23
• 1.3.5 CYLD的同工型23-24
• 1.4 CYLD在血管新生中的作用24-25
• 1.5 本論文研究的主要內(nèi)容及意義25-26
• 第二章 實(shí)驗(yàn)部分26-51
• 2.1 人CYLDA基因在體外過(guò)表達(dá)對(duì)VECs細(xì)胞生長(zhǎng)的影響26-39
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)方法26-32
• 2.1.1.1 VECs的復(fù)蘇與凍存26-29
• 2.1.1.2 腺病毒感染VECs29-30
• 2.1.1.3 CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖30-31
• 2.1.1.4 細(xì)胞劃痕法檢測(cè)細(xì)胞遷移31
• 2.1.1.5 VECs三維膠原成管實(shí)驗(yàn)31-32
• 2.1.2 結(jié)果32-37
• 2.1.1.1 VECs細(xì)胞培養(yǎng)情況32-33
• 2.1.1.2 腺病毒感染VECs結(jié)果33
• 2.1.1.3 細(xì)胞增殖檢測(cè)結(jié)果33-34
• 2.1.1.4 細(xì)胞遷移檢測(cè)結(jié)果34-36
• 2.1.1.5 VECs三維膠原成管實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-37
• 2.1.3 本節(jié)討論37-39
• 2.2 CYLDA轉(zhuǎn)基因小鼠中血管新生的研究39-51
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)方法39-44
• 2.2.1.1 轉(zhuǎn)基因小鼠的飼養(yǎng)和管理39
• 2.2.1.2 轉(zhuǎn)基因小鼠腫瘤模型的制備39-40
• 2.2.1.3 免疫組化染色40-42
• 2.2.1.4 血管新生Matrigel模型42-43
• 2.2.1.5 小鼠主動(dòng)脈環(huán)血管新生實(shí)驗(yàn)43-44
• 2.2.2 結(jié)果44-49
• 2.2.2.1 轉(zhuǎn)基因小鼠腫瘤模型結(jié)果44-45
• 2.2.2.2 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果45-48
• 2.2.2.3 Matrigel模型結(jié)果48
• 2.2.2.4 小鼠主動(dòng)脈環(huán)血管新生實(shí)驗(yàn)結(jié)果48-49
• 2.2.3 本節(jié)討論49-51
• 小結(jié)51-52
• 參考文獻(xiàn)52-61
• 縮略語(yǔ)61-63
• 攻讀碩士學(xué)位期間取得的科研成果63-64
• 致謝64

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 王曉琳;CYLDa對(duì)血管新生作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];西北大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：CYLDa對(duì)血管新生作用的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：265925