本文關(guān)鍵詞：納米載體攜載外源基因進(jìn)行體外細(xì)胞轉(zhuǎn)染的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的意義： 基于納米材料發(fā)展起來的技術(shù)即納米技術(shù)。納米材料的體積小，可以穿透各種機(jī)體屏障，促進(jìn)藥物更好的被機(jī)體吸收利用，并且延長藥物在體內(nèi)的作用時(shí)間，，保持藥物的血藥濃度，既經(jīng)濟(jì)又高效，但目前很多納米轉(zhuǎn)染材料存在成本高，轉(zhuǎn)染效率低，甚至有毒副作用。本文旨在探討一種新型的納米載體——ZM5K5（基于玉米醇溶蛋白合成的系列載體之一）與傳統(tǒng)的PEI納米載體攜載p-EGFP質(zhì)粒進(jìn)行體外細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的研究，為納米載體在生物學(xué)、材料學(xué)、化學(xué)及臨床醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的應(yīng)用提供一個(gè)新的思路。 方法： 本文首先應(yīng)用高效大腸桿菌工程菌種Top10進(jìn)行p-EGFP質(zhì)粒在含100mg/ml氨芐青霉素的液體LB培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)增，經(jīng)過質(zhì)粒DNA的提取、濃度測定后，分別與ZM5K5和傳統(tǒng)的PEI載體進(jìn)行包裝，同時(shí)進(jìn)行A549細(xì)胞的培養(yǎng)，轉(zhuǎn)染時(shí)選用opti-MEM，最終將被ZM5K5和PEI包裹的質(zhì)粒DNA分別轉(zhuǎn)染到A549細(xì)胞中，用共聚焦顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效果。 結(jié)果： 1.通過液體LB培養(yǎng)的Top10菌種終濃度經(jīng)可見光分光光度計(jì)測定后，OD260/280為0.4，菌液呈現(xiàn)乳白色，菌體生長處于對數(shù)生長期。菌液離心后得到0.6克濕菌，進(jìn)行質(zhì)粒DNA的提取，終濃度為2.63μg/μl。 2.人肺腺癌A549細(xì)胞在DMEM培養(yǎng)基5%濃度的胎牛血清條件下，生長狀態(tài)良好，細(xì)胞正常貼壁，增殖迅速，轉(zhuǎn)染前細(xì)胞覆蓋率達(dá)80%。 3.經(jīng)新型納米載體ZM5K5包裹的質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞的效率要高于傳統(tǒng)的PEI納米載體，且前者綠色熒光較為穩(wěn)定不易淬滅。 4.優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件，當(dāng)培養(yǎng)基中胎牛血清濃度為10%，轉(zhuǎn)染時(shí)選用opti-MEM，質(zhì)粒DNA稀釋比例為1：8，轉(zhuǎn)染時(shí)間36h，培養(yǎng)條件37℃和5%CO2恒溫培養(yǎng)時(shí)，納米載體ZM5K5和bPEI進(jìn)行質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)染效率均有所提高，ZM5K5的轉(zhuǎn)染效果仍好于bPEI。 結(jié)論： 1. ZM5k5可以成功攜載質(zhì)粒DNA，并在體外成功轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞； 2.新型納米載體ZM5K5包裹的質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞的效果好于傳統(tǒng)的PEI載體； 3. ZM5K5納米載體的轉(zhuǎn)染效果受DNA的濃度、轉(zhuǎn)染時(shí)間等因素影響。
【關(guān)鍵詞】：納米載體 質(zhì)粒DNA 玉米醇溶蛋白 PEI
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R329.2;TB383.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文縮寫詞表10-11
• 第一章 緒論11-12
• 第二章 文獻(xiàn)綜述12-22
• 2.1 納米材料12
• 2.2 納米材料的應(yīng)用12-13
• 2.3 納米材料在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用13-16
• 2.4 納米載體攜載外源基因16-19
• 2.4.1 納米基因載體的種類和選擇16-17
• 2.4.2 外源基因轉(zhuǎn)染17-18
• 2.4.3 納米材料包裹外源基因的體外細(xì)胞轉(zhuǎn)染18-19
• 2.5 以納米材料作為基因載體的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展19-20
• 2.6 玉米醇溶蛋白及相關(guān)細(xì)胞轉(zhuǎn)染載體20-22
• 第三章 材料與方法22-29
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料22-23
• 3.1.1 A549 細(xì)胞的獲取22
• 3.1.2 質(zhì)粒 DNA 材料的獲取22
• 3.1.3 實(shí)驗(yàn)所用試劑22-23
• 3.1.4 實(shí)驗(yàn)所用儀器及器材23
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法23-28
• 3.2.1 A549 細(xì)胞的傳代培養(yǎng)23-24
• 3.2.2 將質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)入大腸桿菌細(xì)胞及質(zhì)粒 DNA 的制備24-26
• 3.2.3 PEI 溶液的制備26
• 3.2.4 ZM5K5 溶液的制備26-27
• 3.2.5 A549 細(xì)胞轉(zhuǎn)染27-28
• 3.2.6 圖像采集28
• 3.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析28-29
• 第四章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-34
• 4.1 瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒 DNA 的完整性29
• 4.2 ZM5K5 和 bPEI 納米載體攜載 p-EGFP 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 A549 細(xì)胞29-31
• 4.3 PEI 載體和 ZM5K5 載體攜載 p-EGFP 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 A549 細(xì)胞條件的優(yōu)化31-34
• 第五章 討論34-37
• 第六章 結(jié)論37-38
• 創(chuàng)新性總結(jié)38-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果43-44
• 致謝44

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 蔣圣娟;郭棟;潘芳芳;潘煜;王玉紅;陳光;;食用菌凝集素的特征與功能[J];安徽科技學(xué)院學(xué)報(bào);2014年03期

2 郭棟;潘芳芳;潘煜;王玉紅;陳光;蔣圣娟;;五種食用菌凝集素的提取及凝集活性測定[J];安徽科技學(xué)院學(xué)報(bào);2014年03期

3 馬亞魯;李宇婷;王豐;王鵬;李國書;方武成;;疏水性Silicalite-1/zein復(fù)合負(fù)載膜的制備及醇/水分離性能[J];膜科學(xué)與技術(shù);2013年04期

4 劉貴金;汪紅娣;江燕斌;;玉米醇溶蛋白用作藥物輸送系統(tǒng)載體的研究進(jìn)展[J];化工學(xué)報(bào);2013年10期

5 MENG QingShuo;YIN Qi;LI YaPing;;Nanocarriers for siRNA delivery to overcome cancer multidrug resistance[J];Chinese Science Bulletin;2013年33期

6 王志暉;徐斌;;玉米朊的性質(zhì)特征、生產(chǎn)現(xiàn)狀與應(yīng)用前景[J];糧食與食品工業(yè);2013年05期

7 王宇曉;徐同成;劉麗娜;邱斌;劉瑋;劉振華;杜方嶺;陶海騰;;玉米醇溶蛋白生物活性評價(jià)研究[J];農(nóng)產(chǎn)品加工(學(xué)刊);2014年04期

8 王彬輝;章文紅;張曉芬;賀露佳;吳敏;;腦靶向納米載體材料研究進(jìn)展[J];實(shí)用藥物與臨床;2014年10期

9 趙妍;田曉花;;玉米醇溶蛋白研究進(jìn)展[J];糧食與油脂;2015年01期

10 徐慧;陳野;;電場處理改善玉米醇溶蛋白膜理化性質(zhì)[J];農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào);2015年08期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊華;CL-PEG-MnFe_2O_4納米膠束介導(dǎo)的腫瘤微血管和微淋巴管雙重靶向MRI成像[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

2 章駿斌;siRNA成藥性的化學(xué)研究：普適堿基修飾以及新型納米給藥體系構(gòu)建[D];南開大學(xué);2013年

3 呂樹娟;HBV-CpG誘導(dǎo)抗乙型肝炎病毒免疫應(yīng)答[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2014年

4 任曉鋒;掃頻超聲預(yù)處理對玉米醇溶蛋白特性及其酶法制備ACE抑制肽的影響[D];江蘇大學(xué);2014年

5 李夏林;仿生控釋BMP-2和BMP-7的PELA微球支架的研制及其修復(fù)大鼠骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2014年

6 高志明;大豆親脂性蛋白的界面吸附、乳化及輸送特性研究[D];華南理工大學(xué);2014年

7 王麗娟;玉米醇溶蛋白膠體顆粒的制備及應(yīng)用研究[D];華南理工大學(xué);2014年

8 王啟明;基于聚谷氨酸構(gòu)象轉(zhuǎn)變構(gòu)建納米靶向復(fù)合膠束及其抗黑色素瘤研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

9 劉洋;RVG29修飾腦靶向納米藥物遞釋系統(tǒng)的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

10 張宇;新型改性淀粉的結(jié)構(gòu)與性能關(guān)系的研究[D];華中師范大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李鵬;層層自組裝多功能納米基因載體的研究[D];山東大學(xué);2011年

2 王新明;小麥秸稈凍融—酸堿相結(jié)合的預(yù)處理工藝研究[D];陜西科技大學(xué);2013年

3 俞燕爾;玉米醇溶蛋白復(fù)合納米纖維膜的制備及性能研究[D];浙江理工大學(xué);2013年

4 金滔;羥喜樹堿MePEG-PLA納米粒的制備及其體外抗腫瘤研究[D];浙江中醫(yī)藥大學(xué);2013年

5 洪宇;改善玉米醇溶蛋白水溶性的研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

6 馬金榮;傳染性法氏囊病病毒VP2與C3d串聯(lián)基因重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及其免疫功能分析[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

7 張婷婷;可食性玉米蛋白膜制取關(guān)鍵技術(shù)的研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

8 黎亢抗;玉米醇溶蛋白納米粒子的制備及其抗菌膜材料的研究[D];華南理工大學(xué);2013年

9 張淑燕;Skp2和P27在淚腺多形性腺瘤和腺樣囊性癌中的表達(dá)及其意義[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

10 胡世明;大豆蛋白質(zhì)材料的化學(xué)改性和增塑研究[D];天津科技大學(xué);2011年

  本文關(guān)鍵詞：納米載體攜載外源基因進(jìn)行體外細(xì)胞轉(zhuǎn)染的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：265792