【摘要】： 近年來，胚胎干細(xì)胞(ES cells)以其具有全能性、可操作性和可塑性等諸多優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)成為醫(yī)學(xué)和生命科學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一。研究者們試圖用ES細(xì)胞建立糖尿病、老年型癡呆、帕金森氏癥等遺傳疾病轉(zhuǎn)基因動物模型。在這些研究中，最關(guān)鍵的是ES細(xì)胞的來源和定向誘導(dǎo)分化問題。進(jìn)行一系列研究必須要有足夠的ES細(xì)胞，特別是建立轉(zhuǎn)基因動物模型，需要10代以內(nèi)的ES細(xì)胞；而用作細(xì)胞治療研究也必須解決其他分化細(xì)胞的影響問題。 在我們的實(shí)驗(yàn)中，以小鼠ES—D3細(xì)胞系為對象，通過細(xì)胞培養(yǎng)大量增殖未分化細(xì)胞，再用兩種方法進(jìn)行ES細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞的誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)。首先從胚體(EBs)本身探討ES細(xì)胞內(nèi)部調(diào)控誘導(dǎo)分化的機(jī)制，用懸浮培養(yǎng)、懸滴培養(yǎng)、懸浮轉(zhuǎn)懸滴培養(yǎng)的方法培養(yǎng)出不同時間的EBs，再加以RA處理，觀察比較EBs對ES細(xì)胞神經(jīng)分化的影響；在此基礎(chǔ)上，用不同濃度的RA處理EBs，分析誘導(dǎo)劑RA對ES細(xì)胞神經(jīng)分化的影響。結(jié)果表明，用10~(-6)M的RA處理懸滴培養(yǎng)3d轉(zhuǎn)懸浮培養(yǎng)1d的EBs 4d，能得到較高的神經(jīng)分化比例。 同時，為以后開展轉(zhuǎn)基因動物模型的研究，我們還進(jìn)行了小鼠ES細(xì)胞建系的部分工作。以ICR小鼠和昆明小鼠為實(shí)驗(yàn)對象，采用超數(shù)排卵的方法獲得小鼠胚胎，培養(yǎng)在用絲裂霉素C處理過的ICR小鼠和昆明小鼠MEF細(xì)胞飼養(yǎng)層上，選取適當(dāng)時間離散增殖的ICM和類ES細(xì)胞集落，分析了在小鼠ES細(xì)胞建系過程中，飼養(yǎng)層細(xì)胞、消化液及不同品系來源的胚胎的影響。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看，ICR小鼠和昆明小鼠兩種來源的飼養(yǎng)層細(xì)胞對胚胎貼壁、ICM增殖無影響，，消化液作用影響明顯，以0.125％trypsin+0.02％EDTA消化10～15min為宜。以上結(jié)果表明：ICR小鼠比昆明小鼠更易進(jìn)行ES細(xì)胞的建系工作。
【圖文】：

的形態(tài)要好(圖2)，ES細(xì)胞呈集落狀或島嶼狀生長，邊緣清楚，結(jié)構(gòu)致密，細(xì)胞之間界限部清楚。當(dāng)撤去LIF及沒有MEF細(xì)胞作飼養(yǎng)層的情況下，ES細(xì)胞就自發(fā)形成胚體(EBs)。用懸浮或懸滴不同培養(yǎng)方式得到的EBs(圖3)分別用含1x10--‘mol/LRA的培養(yǎng)基培養(yǎng)4d，然后撤去RA，換用常規(guī)的ES培養(yǎng)基，24h后就開始分化(圖4)，EBs外圍逐漸出現(xiàn)成纖維細(xì)胞、扁平上皮細(xì)胞和神經(jīng)元樣細(xì)胞(當(dāng)突起長度超過胞體直徑的5倍時就判定為神經(jīng)元樣細(xì)胞[湯富酬，2001】)(圖5)，同時有細(xì)胞凋亡現(xiàn)象。繼續(xù)培養(yǎng)，神經(jīng)元樣細(xì)胞l旬形成網(wǎng)絡(luò)樣結(jié)構(gòu)(圖5)。圖2ES細(xì)胞(a)長在MEF滋養(yǎng)層細(xì)胞上的ES細(xì)

Fig.4分化中的EBsDifferentiatingEBs
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R329.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2657670