【摘要】：樹突狀細胞(dendritic ceils，DC)是機體內(nèi)最重要的一群專職性抗原遞呈細胞(antigen presenting cells，APC)，也是機體免疫應(yīng)答的有力啟動者。近年來，隨著DC的功能和生物學(xué)特性被不斷認識，DC在腫瘤免疫、移植免疫和抗感染免疫等方面日益受到人們的重視。 DC的前體細胞來源于骨髓造血干細胞，前體細胞伴隨血流到達外周組織，分化為未成熟DC。在腫瘤免疫應(yīng)答中，未成熟DC攝取腫瘤抗原物質(zhì)，加工、處理成小分子的多肽片段，再把這些片段與主要組織相容性復(fù)合物(major histocompatibility complex，MHC)結(jié)合，表達在細胞表面。逐漸成熟的DC離開腫瘤抗原部位，進入淋巴組織，定居于淋巴結(jié)的T細胞區(qū)。在遷移的過程中，DC發(fā)生一系列的變化，逐漸失去攝取抗原的能力，上調(diào)表達共刺激分子和組成性趨化因子受體，分泌多種趨化因子及細胞因子。成熟DC在淋巴結(jié)與初始T細胞相互作用，表面的抗原肽-MHC分子復(fù)合物被T細胞表面受體(T cell antigen receptor，TCR)識別產(chǎn)生抗原特異性信號，同時DC表達的共刺激分子與T細胞表面的相應(yīng)分子結(jié)合，為T細胞提供第二信號從而促進T細胞活化增值。此外，DC還分泌一些細胞因子，如IL-1、IL-6、IL-12等，，使T細胞進一步活化、增殖發(fā)育為具有腫瘤特異性殺傷性的細胞毒性T淋巴細胞(cytotoxic T lymphocytes，CTL)。CTL通過分泌具有抗腫瘤作用的效應(yīng)分子穿孔素和顆粒酶發(fā)揮作用，穿孔素單體在靶細胞膜上形成不同孔徑的跨膜通道，使顆粒酶進入靶細胞，引起靶細胞凋亡，從而產(chǎn)生針對相應(yīng)靶細胞的細胞免疫應(yīng)答。 DC在體內(nèi)遷徙活化，激發(fā)T細胞活化為CTL，發(fā)動抗腫瘤免疫應(yīng)答是一系列復(fù)雜而精細的過程，涉及到多個因素的調(diào)控，包括協(xié)同刺激信號的刺激、趨化因子及其受體在DC不同周期的轉(zhuǎn)變等。作為其中最強有效的激發(fā)信號之一，CD40信號激 發(fā)能促進DC成熟，明顯上調(diào)細胞表面其他共刺激分子的表達，為T細胞的活化提供 所必需的第二信號，促進Dc產(chǎn)生幾一2、IL一12和TNF一a、IFN鄧等多種細胞因子，從 而啟動各類初始T細胞發(fā)生免疫應(yīng)答。而CD40信號激發(fā)對于DC的遷徙能力，和 由DC激發(fā)的活化CTL的遷徙及其抗腫瘤能力的影響尚未有系統(tǒng)確切的研究，如何 理解上述各因素之間的相互作用和內(nèi)在聯(lián)系，如何將不同成熟階段DC的遷徙特性， 以及DC激發(fā)的活化CTL細胞的遷徙和抗腫瘤能力加以合理利用，對于設(shè)計更加有效 的DC和CTL抗腫瘤疫苗應(yīng)用于臨床有著重要的意義。 1.激發(fā)性CD40單抗SCn對樹突狀細胞遷徙能力影響的研究:本研究利用抗原負 載后，聯(lián)合CD40激發(fā)性單抗5Cll或TNF一a激發(fā)，促進外周血CD14+單核細胞來源 的DC成熟活化;Real一T而e PCR和FACS檢測在不同方法刺激和成熟階段的DC趨 化因子分泌、趨化因子受體的表達譜;Transwell微孔遷徙實驗檢測DC的遷徙能力。 實驗結(jié)果顯示:(1)未成熟DC低表達共刺激分子和組成性趨化因子受體;抗原負 載后DC上調(diào)表達共刺激分子和趨化因子受體的表達;聯(lián)合SCll誘導(dǎo)成熟具有增強 DC分泌組成性趨化因子SDF一la、ELC和IP一10的能力;高水平的趨化因子可以通 過自分泌作用，適度下調(diào)成熟DC自身高表達的組成性趨化因子受體CXCR4、CCR7。 (2)未成熟DC對各趨化因子和腫瘤上清的遷徙能力強于各組成熟DC;抗原負載 后24h的DC表現(xiàn)出對生理性低濃度趨化因子的遷徙特性，對腫瘤上清的遷徙能力 明顯下降;聯(lián)合SCll誘導(dǎo)的成熟DC具有對高濃度趨化因子的遷徙傾向性，對腫瘤 上清的遷徙能力強于其他組成熟DC，各組成熟DC的遷徙均具有一定的腫瘤特異性。 以上結(jié)果提示:不同促成熟因素誘導(dǎo)和不同成熟階段的DC具有各自獨特的遷徙特 性，綜合應(yīng)用DC的遷徙特性在腫瘤治療中具有潛在的應(yīng)用價值。 2.激發(fā)性CD40單抗SCn對樹突狀細胞激發(fā)的活化CTL遷徙能力的影響:本研究 采用FACS檢測T細胞在活化過程中趨化因子受體的表達:Transwell微孔遷徙實驗 檢測活化CTL向DC上清，腫瘤上清及趨化因子的遷徙能力。結(jié)果顯示:(l)各組 DC均能促使初始T細胞在活化發(fā)育成為CTL期間上調(diào)趨化因子受體CXCR3的表 達，其中以CD40激發(fā)性單抗SCll誘導(dǎo)的成熟DC激發(fā)的活化CTL尤其明顯，同 時此組成熟DC通過分泌高濃度的相應(yīng)配體IP一10，有效的趨化活化CTL向DC上清 遷徙。(2)SCll誘導(dǎo)的成熟DC激發(fā)的活化CTL具有很強的向腫瘤上清的遷徙特 子 性，其遷徙具有腫瘤特異性，此組活化CTL穿越內(nèi)皮細胞的能力亦強于其他各組活 化CTL。以上結(jié)果提示:CD40激發(fā)性單抗SCll誘導(dǎo)的成熟DC可以有效的激活T 細胞，促進T細胞上調(diào)表達CXCR3，增強CTL向趨化因子和腫瘤上清的遷徙和穿 越血管內(nèi)皮細胞的能力。 3:激發(fā)性CD40單抗5Cll對DC激發(fā)的活化CTL體外抗腫瘤能力的影響:本研究 采用ELISA試劑盒法檢側(cè)細胞培養(yǎng)體系上清中幾一2、IFN一Y的分泌，溶血實驗和 DNTB十BLT顯色法檢側(cè)活化CTL胞漿穿孔素和顆粒酶的釋放，光鏡觀察和“‘Cr釋放 法檢測各組活化C幾的體外抗腫瘤能力。結(jié)果顯示:(1) CD40激發(fā)性單抗SCll 誘導(dǎo)的成熟DC具有很強的刺激T細胞增值活化的能力。(2) SCll誘導(dǎo)的成熟DC 促進T細胞分泌IL一2和IFN斗，從而增強Dc激發(fā)活化的CTL抗腫瘤效應(yīng)分子穿孔 素和顆粒酶的釋放。(3) SCll誘導(dǎo)的成熟DC?
【圖文】：

活化和其誘導(dǎo)的CTL特異性抗腫瘤免疫中的作用第一部分比則呈中等度的表達(P<0.01)(圖卜2)。流式細胞儀檢測5Cll誘導(dǎo)的成熟DC表面趨化因子受體的表達和相應(yīng)熒光強度也低于其他兩組(P<0.01)(圖1一3一圖1一6)。上述結(jié)果顯示CD40激發(fā)性單抗SCll，具有很強的刺激DC分泌組成性趨化因子的作用，高濃度的趨化因子可能通過自分泌的作用適度下調(diào)成熟DC自身高表達的相應(yīng)趨化因子受體。2.3激發(fā)性CD40單抗5Cll對DC遷徙能力的影響:炎癥性趨化因子RANTEs，和不同濃度的組成性趨化因子SDF一la和SLC，對不同成熟階段的DC的趨化能力研究證明，各濃度的趨化因子對未成熟DC皆有較強的趨化作用，而對成熟DC的趨化能力明顯減弱伊<0.01)。進而證實低表達組成性趨化因子受體的未成熟DC對高濃度的趨化因子有著較強的遷徙能力(P<0.01):而抗原負載后24h的DC表現(xiàn)為對低濃度的趨化因子有著較強的遷徙能力口<0.05);;抗原負載聯(lián)合CD40激發(fā)性單抗SCll誘導(dǎo)的成熟DC對高濃度的趨化因子則有著相對較強的應(yīng)答能力伊<0，05);TNF一a激發(fā)的成熟DC則未觀察到對于某個特定濃度趨化因子的遷徙傾向性(圖1一7一圖1一9)。在各組DC向腫瘤上清的遷徙實驗中

八刀ti.RajiabilityinvitrobyDC一stirnulatedCTLunderlight而croseoPe(Zoox)NotcA:illlDC·TB:Ag-DC·TC:Ag-SCI卜DC一D:Ag-TNF口DC-T圖3一8各組DC激發(fā)的CTL抗XG一2腫瘤細胞實驗Fig.3一SA刀ti一XG一2abilityinvitrobyDC一stimulatedCTLunderlightmieroseope(Zoox)NoteA:imDC·TB:Ag一DC一TC:Ag-SCll一DC一TD:A兮TNF·DC·T50
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R392

【引證文獻】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 師帥帥;CD40、CD40L、OX40抗原在急性髓性白血病細胞中的表達及意義[D];山西醫(yī)科大學(xué);2007年

本文編號：2657499